《人载脂蛋白AⅠ羊多抗血清制备技术规程》.pdfVIP

ICS 65.020.20 B 41 DB32 江 苏 省 地 方 标 准 DB32/T XXXX -2022 人载脂蛋白A Ⅰ羊多抗血清制备技术规程 Technical regulations for production of sheep anti-human apolipoprotein A Ⅰ polyclonal antiserum 江苏省市场监督管理局 发布 DB32/T XXXX-2022 人载脂蛋白AⅠ羊多抗血清制备技术规程 1 范围 本文件运用于人载脂蛋白 AⅠ羊多抗血清制备中羊品种选择和饲养要求、免疫佐剂 选用、抗原乳化、抗原接种、抗体效价评估、抗血清制备的步骤和方法。 2 规范性引用文件 本文件无规范性引用文件。 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 载脂蛋白AⅠ Apolipoprotein AⅠ 用于运输血液中脂类的高密度主要载脂蛋白, A1是载脂蛋白A族中最多的一种组分， 约占HDL颗粒的65%，主要在肝脏、部分在小肠合成。 4 羊的选择和饲养要求 选用体重30kg—40 kg生长发育良好、10月龄左右的健康羊。采用群养放牧，适当补饲 方式，每天早晚观察羊的健康状况。 5 抗原要求 人血清通过优化PEG沉淀、离子交换吸附的方法，纯度达96%。 6 免疫佐剂选用 首次免疫佐剂采用弗氏完全佐剂，从第二次免疫开始，采用弗氏不完全佐剂。 7 抗原乳化 采用高速剪切法乳化抗原。乳化容器需放置在降温夹套中，将佐剂按需要量置于乳化 容器中，用吸管以60滴/min 的速度缓慢加入载脂蛋白AⅠ抗原溶液，用漩涡混合器以1.5万 1 DB32/T XXXX-2022 rmp/min混合均匀，抗原溶液全部加完后，再持续混合15min。 8 抗原接种免疫剂量和部位 每只羊免疫抗原剂量为 1mg，抗原浓度为 1mg/ml,为各部位平均接种。不同免疫次数 间的间隔天数和部位，见表1。 表1 免疫剂量和部位 间隔天数 次数 免疫接种部位 （d ） 第1 次 0 腹股沟、肘部、耳后、额下、背侧和足窝 腹股沟、肘部、耳后、额下、背侧和腹股沟 第2 次 15 淋巴结点 第3~9 次 9 腹股沟、肘部、耳后、额下和背侧 9 抗体效价评估 在第7次免疫后动脉采血检测抗体水平，采用琼脂扩散法进行效价测定,效价不低于1： 16，可以判定为合格，可以采血。 10 抗血清制备 10.1 采血 在检测抗体水平达到效价要求后，采用动脉一次性采血。血液用250 mL 玻璃瓶收集， 血液占玻璃瓶的1/5。 10.2 血清制备 把收集好血液的玻璃瓶，放在37℃恒温水浴锅中 1h 后，把玻璃瓶从水浴锅中取出； 再把血清从玻璃瓶中吸出；用低速离心机4500 rmp/min ，离心15 min，取上清液，颜色为 乳白色或微黄色，去掉沉淀物杂质。