高中生物课件：微生物的计数专题复习.ppt

浙江省开化中学 汪伟仙 测定微生物数量的方法 直接计数法 显微镜直接计数法 间接计数法 稀释涂布分离法 比浊法 一、显微镜直接计数法 是将少量待测样品的悬浮液置于一种特别的具有确定面积和容积的载玻片上，于显微镜下直接计数的一种简便、快速、直观的方法。 细菌计数板（一般）--薄 血细胞计数板（菌体较大）酵母菌\霉菌孢子 --厚 （二者原理和部件相同，只是厚薄不同而已） 血细胞计数板 血球计数板，通常是一块特制的载玻片，其上由四条槽构成三个平台。中间的平台又被一横短浅槽隔成两半，每一边的平台上各刻有一个计数室，计数室呈方格网状（也就是说，每个血球计数板有两个计数室） 25个中格 16个小格 16个中格 25个小格 25X16 = 400小格 16X25 = 400小格 * * * * * * * * * 抽样检测： 5×16=80个小格 抽样检测： 4×25=100个小格 一、显微镜直接计数法 计数器大方格规格： 2mm×2mm×0.1mm 或1mm×1mm×0.1mm 浙科版默认第一种 将获得的酵母细胞培养液稀释100倍后，用血细胞计数板（规格为2mm×2mm×0.1mm）计数，观察到的计数室中细胞分布如图，则培养液中酵母细胞的密度是 个/mL。 3.6×107 练一练 为监测酵母的活细胞密度，将某发酵液稀释1000倍后，经等体积台盼蓝染液染色(活细胞无色，死细胞蓝色) ，用血细胞计数板计数（规格2mm×2mm×0.1mm,有25个中方格），计数5个中格中的细胞数，理论上 色细胞的个数应不少于 ，才能达到每毫升3×109个活细胞的预期密度。 120 无 练一练 注意事项 1、测定时，酵母菌液要摇匀，防止酵母凝聚沉淀。 2、酵母细胞若有粘连，要数出团块中的每一个细胞。 3、活酵母有芽殖现象，若芽体体积超过母细胞体积的1/2，则算独立个体。 4、压在方格线上的细胞一般只计此格的左线和上线的菌体。 5、计数总数不少于300个细胞。 6、方格内细胞数目多余300个或数不过来，可以用稀释的方法进行细胞计数。 小组讨论：你认为哪些因素会影响计数的准确性？ 5个中方格内的总数 1个中方格内的总数 二、间接计数法——比浊法 本法主要是用于测定能形成悬浮体的沉淀物质。根据悬浮体的透射光或散射光的强度以测定物质组分含量的一种分析方法。当光线通过一混浊溶液时，因悬浮体选择地吸收了一部分光能，并且悬浮体向各个方向散射了另一部分光线，减弱了透过光线的强度。 1.比浊测定法（必修三P72） 测量和比较透过悬浮体的光强度以决定其浓度的方法叫做比浊测定法。 2.散射测浑法 测量或比较悬浮体散射光的强度以决定其浓度的方法叫做散射测浑法或比雾法。 比浊计、光电比色计和分光光度计 比浊计、光电比色计和分光光度计原理是相同的，实验方法也相似。通常，比色计或分光光度计都可用于比浊分析。也有专门用于比浊分析的仪器，即浊度计或比浊计。 例、亚硝酸盐含量的测定：样品处理后加入显色液，再置于 中用光电比色计测定 ，影响其数值大小的因素有 。 比色杯 OD值 光程、波长、浓度 比尔—朗伯定律数学表达式：A=Kbc A为吸光度；K为摩尔吸收系数,它与吸收物质的性质及入射光的波长λ有关；c为吸光物质的浓度；b为吸收层厚度,也就是光程。 从公式可以看出,光程越大,吸光度越大。 来自《选修1实验册》： 0.2 10 三、间接计数法——涂布分离法法 稀释 倍数 10-4 10-5 菌落数 1 2 3 平均值 1 2 3 平均值 计算公式： 每克样品中的菌株数= C V x M C：某一稀释度下平板上的平均菌落数 V:涂布平板所用的体积 M：稀释倍数 某实验中，将1mL水样稀释100倍，在3个平板上用涂布法分别接入0.1mL稀释液；经适当培养后，3个平板上的菌落数分别为39、38和37。据此可得出每升水样中的活菌数为（ ） 3.8x107 四、显微镜计数法、比浊法、涂布分离法的比较 适用范围 优点 缺点 显微镜计数法 比浊法 涂布分离法 所需设备简单，可迅速得到结果，能同时观察微生物形态特征 难以计数微小的细菌；难以区分死、活 适用于纯培养悬浮液中各种单细胞菌体的计数 由于死亡的细菌不能繁殖成菌落，所以该法只计数活菌数 该法统计的菌落数往往比活菌的实际数目低，原因是当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落 不但可以计数，还可以观察菌落特征， 主要是用于测定能形成悬浮体的沉淀物质 简便快捷 需要作出光密度—菌数标准曲线；颜色太