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大黄中大黄素的提取、分离和鉴定 一、实验目的与要求 1．熟悉蒽醌类成分的提取分离方法。 2．掌握PH梯度提取法的原理和操作技术。 3．学习用硅胶柱色谱法分离精制大黄素。 4．学习羟基恩醌类化合物的鉴定方法。 二、实验方法 （一）、基本原理 大黄中羟基葸醌类化合物多数以苷的形式存在，故先用稀硫酸溶液把蒽醌苷水解成苷元，利用游离 葸醌可溶于热氯仿的性质，用氯仿将它们提取出来。由于各羟基葸醌结构上的不同所表现的酸性不 同，用pH梯度萃取法分离它们；大黄酚和大黄素甲醚酸性相近，利用其极性的差别，用柱色谱分 离之。 （二）操作步骤 实验步骤 实验操作 实验现象和结果 总羟基蒽 1 称取大黄粉3.5g，用滤纸包裹，置索 乙醚提取液为黄色澄清溶液。 醌苷元的 氏提取器中，圆底烧瓶中加入乙醚 提取 150ml，回流提取2h，得乙醚提取液。 2 点板，展开，展开剂为石油醚-乙酸 硅胶板上可见四个斑点，从上往 乙酯 （7:3）。 下依次为黄色斑点、橙色斑点、 黄色斑点、黄色斑点。 pH梯度 1 大黄酸的分离和提纯：将提取液用 水层提取液为呈紫红色。 萃取分离 5%NaHCO₃ 振荡提取数次，分出水 盐酸酸化时有大量气泡生成。 层，重复提取数次后合并水层提取 酸化后得到黄色沉淀。 液，用盐酸酸化至 pH3,得黄色沉 淀。抽滤，水洗沉淀，再用丙酮洗， 干燥后待测。 2 大黄素的分离和纯化：碳酸氢钠溶液 水层提取液呈红色。 提取后的乙醚层以 5%Na CO ₃ 振荡 盐酸酸化后得到黄色沉淀。 2 提取数次，分出水层，合并水层提取 液，加盐酸至酸性 （pH6左右），得黄 色沉淀，抽滤，水洗沉淀，再用丙酮 洗，干燥后待测。 3 芦荟大黄素的分离和提纯：碳酸钠溶 水层提取液层红色。 液提取后的乙醚层，用 0.25％NaOH盐酸酸化后得到橙色沉淀。 振荡提取数次，合并水层提取液，加 盐酸至pH约为6，得橙色沉淀。抽滤， 水洗沉淀，干燥后待测。 4 大黄酚和大黄素甲醚的分离和提纯： 水层提取液呈深红色。 将步骤3得到的乙醚层用5％NaOH振 盐酸酸化后得到黄色沉淀。 荡提取数次至无色，合并水层提取 液，加盐酸酸化，得黄色沉淀。抽滤， 水洗沉淀，干燥后待测。 三、实验结果 （1）分离与精制大黄酸的过程中得到了黄色的针状结晶，此结晶就是大黄酸。 （2）分离与精制大黄素过程中得到了橙色针状结晶，此结晶就是大黄素。 （3）分离与精制芦荟大黄素的过程中得到了黄色针晶，这个就是芦荟大黄素。 （4）大黄酚和大黄素甲醚的分离和提纯中得到的黄色沉淀为大黄酚和大黄素甲醚的混合物。 （5）经薄层色谱鉴别后得到五条颜色不同的条带，如图所示： 四、 ： 结论 此次试验摸索了传统方法结合柱色谱分离大黄中活性成分的方法，由于需要多次重结晶与纯化才能 得到，所以此方法有一定的麻烦，且由于操作不是很标准，致使得到的结果不是很准确。