细胞表面APP介导AD相关神经病理改变的机制研究的开题报告.docxVIP

细胞表面APP介导AD相关神经病理改变的机制研究的开题报告 一、研究背景 阿尔茨海默病（AD）是一种慢性神经退行性疾病，是老年人中最常见的饱和性老年痴呆症。该疾病的重要特点是脑内淀粉样β-淀粉样蛋白（Aβ）聚集和神经元丧失。以往的研究发现，Aβ沉积与细胞内受体和信号传递通路有关，但其确切的导致机制仍不清楚。 最近的研究表明，细胞表面的β-淀粉样前体蛋白（APP）可能参与了AD相关神经病理改变的发生。APP是一种膜蛋白，在外显结构中呈现的是N端在外、C端在内。APP的一些异构体会通过酶促水解产生可溶性Aβ片段（sAβ），该片段在AD中的作用仍不清楚。我们猜测sAβ与APP作为细胞表面膜蛋白通过信号通路进一步作用导致神经病理改变的发生。 二、研究计划和方法 1.确定sAβ在AD发生中的作用 我们将使用细胞培养模型，引入目标基因以产生相关APP异构体和/或限制其表达，通过免疫组化法和Western印迹分析分别分析sAβ、APP和其他相关分子在不同细胞系和表达状态下的表达及连接关系。此外，采用crispr/Cas9技术对目标基因进行敲除，检查敲除后的细胞中Aβ沉积的情况及与细胞死亡的关联。 2.探究sAβ结合细胞表面膜蛋白敏感性 我们计划采用双靶点TIRF荧光共振显微镜和单分子跟踪技术，研究sAβ与APP在细胞表面的结合情况和信号通路进一步作用所需时间及其效应。通过合适的内外转录酶法选用一