第一章基因工程的分子遗传学基础.pptVIP

（4）DNA片段加衔接头后连接 如果要连接既不具互补黏性末端又不具平末端的两种DNA片段， 除了上述用修饰一种或两种DNA片段末端后进行连接的方法外， 还可以采用人工合成的衔接头。 先将衔接头连接到待连接的1种或2种DNA片段的末端， 然后用合适的限制性内切核酸酶酶切衔接头， 使待连接的两种 DNA片段具互补黏性末端， 最后在DNA连接酶催化下使两种DNA片段连接，产生重组DNA分子。 此外，也可以根据两DNA片段的末端， 选用合适的衔接头直接把两DNA片段连接在一起。 当前第72页\共有145页\编于星期五\21点 3、激酶 通过催化ATP的γ-磷酸基共价附着在靶分子上，磷酸化特异的底物。 T4噬菌体多核苷酸激酶是一种磷酸化DNA或RNA5’羟基的酶。用于[γ-32P]ATP标记DNA5’端，也可对缺乏5’-磷酸的DNA或人工接头进行磷酸化。 细菌的碱性磷酸酯酶是一种去除DNA 5’-磷酸的酶。用于T4噬菌体多核苷酸激酶进行末端标记前除去5’-磷酸，或用来处理经 切过的载体DNA，防止其重新环化而降低转化效率。 当前第73页\共有145页\编于星期五\21点 T4-多核苷酸磷酸激酶(T4-PNP) 2009-11-26 66 当前第74页\共有145页\编于星期五\21点 三、 DNA聚合酶和RNA聚合酶 以单链DNA作为模板，DNA聚合酶和