温州医学院《细胞工程学》考试重点.docxVIP

第四章细胞培养 1、 体外培养细胞有哪些类型？ （1） 按生长方式：2种类型 粘附型（贴壁型）细胞：附着在某一固相支持物表面才能生长的细胞。 悬浮型细胞：不必附着于固相支持物表面，而在悬浮状态下即可生长的细胞。 （2） 根据粘附生长时形态的不同，主要分为4类：上皮细胞型、成纤维细胞型、游走细胞 型、多形型细胞。 2、 细胞系的生长过程包括哪些主要阶段？每一生长阶段各有什么特征？ 组织培养细胞生命期（Life Span of Culture Cells） 所谓培养细胞生命期，是指细胞在培养中持续增殖和生长的时间，包括原代培养期、传代培 养期及衰退期三个阶段。 （1） 原代培养期（Primary Culture） 也称初代培养，即从体内取出组织接种培养到第一次传代阶段，一般持续1-4周。 特点： 1、 细胞呈活跃移动，可见细胞分裂，但不旺盛。 2、 与体内原组织在形态结构和功能活动上相似性大。 3、 细胞群是异质的，各细胞的遗传性状互不相同，细胞相互依存性强，即细胞独立生存性 差。 4、 初代培养的细胞多呈二倍体核型。 （2） 传代期 传代：体内细胞生长在动态平衡环境中，而组织培养细胞的生存环境是培养瓶、皿或其它容 器，生存空间和营养是有限的。当细胞增殖达到一定密度后，则需要分离出一部分细胞和更 新营养液，否则将影响细胞的继续生存，这一过程叫传代。初代培养的细胞一经传代后便改 称做细胞系（Cell Line）。 特点：在整个生命期中此期的持续时间最长，整个培养过程的主要时期。细胞增殖旺盛，细 胞生长活跃，并能维持二倍体核型。 （3） 衰退期 特点：此期细胞仍然生存，但增殖很慢或不增殖，最后衰退凋亡。 I) 2 4 % S 12 M 16 J3f| 5-4 蛤骅蛔胞的至命询 每代细胞的生长曲线包括哪几个主要时期？各期细胞有何特点? 所谓“一代”是指从细胞接种到分离再培养的一段时间。 包括潜伏期、指数增生期、停滞期。 （1）潜伏期 ＞细胞对传代操作所致损伤的恢复期和对新的生长环境的适应期，一般为期6?24h。 也是原代培养开始时细胞必须经历的时期。 ＞接种到培养器皿内以后，细胞开始经历黏附、贴壁和铺展等过程。 ＞修复损伤，熟悉环境，恢复生长，但很少分裂。 ＞接种的细胞密度越大，数量越多，细胞群体越容易适应体外环境，潜伏期就短。 （2）指数生长期 又叫对数生长期（logarithmic growth phase），是细胞增生最活跃、活力最旺盛的阶 段，培养物中的细胞数量呈指数增长。细胞群体均一，理想的实验用细胞。 ■细胞分裂活动（即增殖活性）的衡量指标： 有丝分裂指数（mitotic index, MI） 细胞群体倍增时间：培养物中细胞数量翻倍的平均时间 MTT法、标记核苷酸（H3-TdR）掺入法、BrdU标记法 注：有丝分裂指数（MI） 指培养物中分裂相数量占全部细胞数量的百分比，统计时，每瓶至少需计数1000个细 胞。 一般细胞的MI约为0.1—0.5%。原代培养物的MI比继代培养物低。连续细胞系和肿瘤 细胞高，可达3%—5%。 ■在接种细胞数量适宜情况下，指数增生期持续3?5天后，随细胞数量不断增多，生 长空间渐趋减少，最后细胞相互接触汇合成片。细胞相互接触后，如培养的是正常 细胞，发生接触抑制。发生接触抑制以后，虽然运动受到限制，但只要营养充分， 细胞仍然能够进行增殖分裂，因此细胞数量仍在增多。 ■但当细胞密度进一步增大，培养液中营养成分减少，代谢产物增多时，细胞因营养 的枯竭和代谢物的影响，则发生密度依赖性细胞生长抑制，导致细胞分裂停止，细 胞数量即不再增加，进入平台期（停滞期）。 （3）停滞期 ■也叫平台期（plateau phase），意即细胞不再分裂增殖，细胞数量维持在某一水平上， 生长活动停滞。 停滞期细胞虽不增殖，但仍有代谢活动，继而培养液中营养渐趋耗尽，代谢产物积累， pH降低。此时需做分离培养即传代，否则细胞会中毒，发生形态改变，重则脱落死亡，故 传代应越早越好。传代过晚（已有中毒迹象）能影响下一代细胞的机能状态。在这种情况下， 虽进行了传代，因细胞已受损，需要恢复，至少还要再传1?2两代，通过换液淘汰死细胞 和使受损轻微的细胞得以恢复后，才能再用。 4、 体外培养的细胞应满足哪些营养成分？ （1） 糖 （2） 氨基酸 （3） 维生素 （4） 促生长因子 （5） 其它物质 5、 培养液中为何要添加一定量的血清？（血清的主要作用） （1） 提供基本营养物质 （2） 提供激素和各种生长因子 （3） 提供结合蛋白 （4） 提供促接触和伸展因子使细胞贴壁免受机械损伤。 （5） 对培养中的细胞起到某些保护作用：血清中含有抗蛋白酶成分，起到中和作用。这 种作用是偶然发现的，现在则有目的的使用血清来终止胰蛋白酶的消化作用。 6