DB32T4000-2021牛结核病诊断技术（γ-干扰素体外 ELISA 法）.pdfVIP

ICS 11.220 CCS B 41 DB32 江 苏 省 地 方 标 准 DB 32/T 4000—2021 牛结核病诊断技术 （γ-干扰素体外ELISA 法） Diagnostic Technique for Bovine Tuberculosis by Interferon-gamma ELISA Assay 2021 - 02 -03 发布 2021 - 03 -03 实施 江苏省市场监督管理局 发 布 DB32/T 4000-2021 前 言 本文件按照GB/T 1.1—2020 《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起 草。 本文件由扬州大学提出。 本文件由江苏省畜牧业标准化技术委员会归口。 本文件起草单位：扬州大学、江苏省动物疫病预防控制中心。 本文件主要起草人：焦新安、陈祥、徐正中、潘志明、陈昌海、殷月兰。 II DB32/T 4000-2021 牛结核病诊断技术 （γ-干扰素体外ELISA 法） 1 范围 本文件规定了牛结核病诊断技术 （γ-干扰素体外ELISA法）的试剂及仪器、检测方法、质量控制和 结果判定等。 本文件适用于牛结核病诊断。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T 18645 动物结核病诊断技术 GB 19489 实验室生物安全通用要求 GB/T 32945 牛结核病诊断 体外检测γ干扰素法 3 术语和定义 本文件没有特别需要界定的术语和定义。 4 原理 感染牛分枝杆菌的牛，其T淋巴细胞已被牛分枝杆菌致敏并产生免疫记忆。当体外再次遇到牛分枝 杆菌特异性抗原（结核菌素）刺激时，牛外周血中淋巴细胞被激活并大量释放γ-干扰素，而未被感染的 牛则不会分泌或低水平分泌γ-干扰素。通过双单克隆抗体夹心酶联免疫吸附试验（ELISA ）检测特异性 γ-干扰素浓度水平，即可诊断牛结核病。 5 试剂及仪器 5.1 试剂 外周抗凝血培养所需材料参见附录 A 。夹心 ELISA 所需试剂和材料参见附录 B 。 5.2 仪器 检测所需仪器参见附录C 。 1 DB32/T 4000-2021 6 检测方法 6.1 试剂配制 检测所需试剂的配制见附录D 。 6.2 样品采集与处理 6.2.1 无菌采集牛尾静脉血 3 mL～4 mL，加入至含肝素锂或肝素钠的抗凝血真空管中，轻轻颠倒 2 次～ 3 次使血液和抗凝剂混合均匀。室温（22±5℃）运送至实验室并在采血后24 h 内进行培养。 6.2.2 分装前轻轻颠倒抗凝血真空管，充分混匀血液样品。将抗凝血无菌加入至 48 孔细胞培养板， 每头牛抗凝血分装 3 孔，1.0 mL/孔