DB32T4016-2021羊李斯特菌病诊断技术.pdfVIP

ICS 65.020.30 CCS B 43 DB32 江 苏 省 地 方 标 准 DB 32/ T 4016—2021 羊李斯特菌病诊断技术 Diagnosisfor goat andsheep listeriosis 2021-03-04发布 2021-04-04实施 江苏省市场监督管理局 发 布 DB32/T 4016-2021 羊李斯特菌病诊断技术 1 范围 本文件规定了羊李斯特菌病的临床诊断、病理学诊断和实验室诊断的技术要求。 本文件适用于羊李斯特菌病的诊断。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成文件必不可少的条款。其中，凡是注日期的引用文 件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本 （包括所有的修改单）适用 于本文件。 GB4789.30 食品安全国家标准 食品微生物学检验 单核细胞增生李斯特氏菌检验 GB 19489 实验室生物安全通用要求。 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 李斯特菌病 listeriosis 由李斯特菌引起人和动物的一种重要的人兽共患传染病，呈散发或暴发发生，主要表现为脑膜炎、 败血症和怀孕母羊流产。 3.2 李斯特菌溶血素O listeriolysin O,LLO 单核细胞增生李斯特菌和伊氏李斯特菌的主要毒力因子，对真核细胞膜具有裂解活性。 4 临床诊断 单核细胞增生李斯特菌引起羊李斯特菌病的临床症状为脑膜脑炎、败血症和流产。发病初期，羊体 温升高1℃～2℃，采食、咀嚼、吞咽困难，头颈呈一侧性麻痹，弯向对侧，做转圈运动。角弓反张，昏 迷卧于一侧，直至死亡。病程短的2d～3d，长的1至3周或更长时间。妊娠母羊流产，羔羊常发生急性 败血症而很快死亡。 伊氏李斯特菌引起羊李斯特菌病的临床症状为胃肠炎、新生羊败血症和怀孕母羊流产，罕见病例呈 脑膜脑炎相关的临床表现。 5 病理诊断 5.1 眼观病变 DB32/T 4016-2021 眼观病变表现如下： a） 神经症状的病羊：脑及脑膜充血、水肿，脑脊液增多，稍浑浊； b） 败血症型的病羊：肝脏呈多灶性坏死，脾脏肿大，心外膜下出血； c） 流产母羊：有胎盘炎，子宫内膜和胎盘充血及广泛坏死。 5.2 组织病理学变化 血液中白细胞总数升高，单核细胞增多，炎性细胞灶及其邻近的血管周围呈套袖现象，占主导的细 胞是淋巴细胞、组织细胞、浆细胞；脑干嗜中性粒细胞液化。 6 实验室诊断 6.1 细菌学诊断 6.1.1 细菌分离和培养 无菌采取病羊的脑脊髓液、脑、肝、脾、心、肺和肾组织，置于放有冰袋的采样箱中 （温度低于 10℃）于24h 之内运回实验室，直接涂片镜检，取样品直接接种到科玛嘉平板上于37℃培养24h，同 时按照附录A 的方法进行增菌和鉴定；或按照GB4789.30 推荐的方法进行增菌，转接到牛津琼脂平板 上，放置在37℃培养，培养至24h 和48h 检查细菌培养情况。 6.1.2 菌落形态及革兰氏染色 菌落形态：李斯特菌在脑心浸液平板上培养24h后，形成直径约为1mm～2mm的乳白色菌落，边 缘整齐、表面光滑、隆起度高，粘稠、易挑起 （附录A中图A.1）。在科玛嘉培养基上形成的菌落呈蓝绿 色，菌落周围有白色晕环 （见附录A中图A.2）。在含七叶苷的琼脂培养基 （如MOX平板）上形成的菌 落呈黑色 （见附录A中A.3）。 革兰氏染色镜检：革兰氏染色阳性的小杆