高效液相色谱法原理与应用.pptVIP

样品测定 5．计算：由于有些对照品标示含量的方式与样品标示量不同，有些是复合盐、有些含水量不同、有些是盐基不同或有些是采用有效部位标示，检验时请注意。 当前第95页\共有136页\编于星期三\16点 方法研究 1．波长选择：首先在可见紫外分光光度计上测量样品液的吸收光谱，以选择合适的测量波长，如最灵敏的测量波长并避开其它物质的干扰。从紫外光谱中还可大体知道在HPLC中的响应值，如吸收度小于0.5时，HPLC测定的面积将会很小。 2．流动相选择：尽量采用不是弱电解质的甲醇-水流动相。 当前第96页\共有136页\编于星期三\16点 3. 流动相 溶剂具有稳定的化学性质 溶剂的选择与使用的检测器要有相容性 溶剂的粘度要小 溶剂的沸点不能太低 溶剂的纯度要高且价格便宜 正相：正己烷、正庚烷、乙醚、二氯甲烷、氯仿等，己烷为主体，加入质子接受体乙醚或甲基叔丁基醚，质子给予体氯仿，偶极溶剂二氯甲烷 反相：水、甲醇、乙腈、四氢呋喃、乙醇及其混合物等，以水为主体，加入质子接受体甲醇，质子给予体乙腈，偶剂溶剂四氢呋喃。 当前第63页\共有136页\编于星期三\16点 4. 影响保留值的因素 溶质结构对保留值的影响： 正相：溶质极性越强，官能团越多，保留值越大 反相：溶质极性越弱，疏水性越强，保留值越大。溶质的保留值与其分子非极性部分的