DB37_T 606-2006牛奶中恩诺沙星和环丙沙星残留量的测定 高效液相色谱法.pdf

ICS 67. 100. 01B40DB37山東东省地方标准DB37/T 606—2006牛奶中恩诺沙星和环丙沙星残留量的测定高效液相色谱法Determination of enrofloxacinciprofloxacin residue in bovine milk highperformance liquid chromatography2005-06-28发布2006-07-01实施山东省质量技术监督局发布 DB37/T 6062006前言本标准由山东省畜牧办公室、山东省畜牧业标准化技术委员会提出。本标准起草单位：山东省畜产品质量检测中心。本标准主要起草人：高迎春、陈玲、冯修光、魏秀丽。 DB37/T 6062006牛奶中恩诺沙星和环丙沙星残留量的测定一高效液相色谱法1范围本标准规定了牛奶中恩诺沙星和环内沙星残留量的高效液相色谱测定法，本标准适用于牛奶中恩诺沙星和环丙沙星残留量的测定，最低检出限为20μg/Kg。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3原理牛奶中的恩诺沙星/环丙沙星经磷酸盐缓冲液提取，再经Cs柱固相萃取后，用HPLC分离，荧光检测器测定，激发波长280nl；发射波长450n。4试剂与材料除非另有规定，仅使用分析纯试剂，水符合GB/T6682一级水的规定。4. 1恩诺沙星和环内沙星对照品：含量均不得少于99.0%。4. 2乙睛（CH,CN）：色谱纯。4.3甲醇（CH,OH）：色谱纯。4.4三乙胺CHsN）4.5氢氧化钠（Na0H）。4.6磷酸(H,PO,)4. 7磷酸二氢钾(KH,PO,)。4.8氢氧化纳客液c【（Na0H）】=5.0moL/L：称取氢氧化钠（4.5）20g（准确至0.1g），用水落解并稀释至100mL。4.9氢氧化钠溶液c【【（Na0H）】=0.03moL/L：量取5.0mo1/L氢氧化钠溶液（4.8）12ml，加水稀释至2000ml，4.10磷酸盐缓冲液：取磷酸二氢钾（4.7）6.8g，加水使溶解并稀释至500ml，用5.0mo1/L氢氧化钠溶液（4.8）调pH至7.0。4.11HPLC流动相：4.11.10.05mol/L磷酸一三乙胺溶液：量取磷酸（4.6）3.4ml，加水稀释至1000ml，用三乙胺（4.4）调pH至2.4，过0.45水系微孔滤膜备用。现用现配。4.11.2流动相：0.05mol/L磷酸三乙胺溶液（4.11.1）+乙睛（4.2）=82+18，混匀，脱气后备用。4. 12恩诺沙星和环丙沙星标准储备液：分别精密称取恩诺沙星/环丙沙星对照品（4.1）各10g（准确至0.01g），至同一1000mL量瓶中，加0.03o1/L氢氧化纳落液（4.8）落解并稀释至刻度，播匀。其浓度为10g/mL4.13恩诺沙星和环丙沙星标准中间液：精密量取恩诺沙星和环丙沙星标准储备液（4.12）1.00mL，置100mL量瓶中，用乙睛（4.2）稀释至刻度，摇匀。其浓度为100ng/mL4.14恩诺沙星和环内沙星标准工作液：精密量取恩诺沙星和环丙沙星标准中间液（4.13）1.00mL、2.00mL、5.00mL、10.00ml、15.00mL、20.00ml、50.00mL于100ml量瓶中，用流动相（4.12）稀释成1 DB37/T606—2006浓度分别1ng/ml、2ng/ml、5ng/ml、10ng/ml、15ng/ml、20ng/ml、50ng/ml的环丙沙星和恩诺沙星系列标准工作液。现用现配。5仪器5. 1高效液相色谱仪：具荧光检测器。5. 2天平：感量0.01g。5. 3分析天平：感量0.0001。5. 4振荡器。5. 5勾浆机（10000r/min）。5. 6离心机（4000 r/min）5. 7真空案。5. 8C萃取柱.5. 9针头过滤器：孔径为0.45m有机系滤膜。5. 10离心管：50ml。6分析步骤6. 1C柱前处理取C柱，依次使用2ml甲醇（4.3）和2ml水润洗后备用。6. 2提取称取5g土0.05g供试试样，置30ml匀浆杯中，加磷酸盐缓冲液（4.10）10.0ml，匀浆30S，匀浆液转入50ml离心管（5.10）中，振荡5nin，离心10min，上清液过ca萃取柱（6.1)。用磷酸盐缓冲液（4.10）10.0ml冲洗刀头及匀浆杯，洗液合并入50ml含残渣离心管中，搅勺，振荡5min，离心10min，上清液过同C萃取柱。用2ml水洗C萃取柱，挤干，精密加入2ml流动相洗脱，挤干，收集