DB37T 494-2004牛胚胎移植技术规程.pdf

ICS 65. 020. 30B 43DB37山东省地方标准DB37/T 494—2004牛胚胎移植技术规程Technical Regulations for Bovine Embryo Transplantation2004-12-23发布2005-01-01实施山东省质量技术监督局发布 DB37/T 494—2004附录C（规范性附录）牛胚胎各发育期的特征和质量分级标准C. 1牛胚胎各发育期的特征C. 1. 1桑椹胚（M)卵裂球轮廊较为明显，细胞团体积儿乎占满卵周间際，C.1.2致密桑胚（CM)卵裂球进一步分裂，细胞团收缩变紧，细胞团占卵周间隙的60-70%。C.1.3早期囊胚（EBL）出现透亮的囊胚腔，此时的滋养层和内细胞团尚难于区分，细胞团占卵周间隙的70-80%。C.1.4囊胚(BL)囊胚腔扩大，滋养层细胞分离，细胞团充满卵周间隙。C.1.5扩张囊胚(EXBL)囊胚腔充分扩张，体积增至1.2-1.5倍，透明带变薄。C.2牛胚胎质量分级标准胚胎的形态结构包括：细胞团的紧密程度、有无游离细胞、透明带是否完整、胚胎的透明度以及脏胎细胞的大小是否一致等等。用形态学方法进行胚胎质量鉴定，将胚胎依次分为1、2、3、4四级。C.2.11级：优秀胚发育正常，胚龄与发育期相吻合，卵裂球轮廉清晰，透明度适中，细胞密度大，卵裂均勾，无水泡样卵裂球，无变性的细胞，C.2.22级：良好胚发育基本符合预定胚龄，轮廉清晰，明暗适中或稍暗或稍浅，细胞密度较小或小型卵裂球过多，有小部分游离出的细胞和水泡样细胞或变性细胞占10一30%C.2.33级：—般胚轮扇不清楚，色泽过暗或过淡，细胞密度小，游离出细胞或变性细胞占30一50%。C.2.44级：不可用胚未受精卵和变性胚。7 DB37/T 494—2004附录D（规范性附录）几种试剂的配置方法D.1保存液加入10—20%特牛血清的FCS-mPBS液D.210%甘油冷冻液10%甘油+20%FCSmPBS液D.38%乙二醇冷冻液8%乙二醇+20%FCSmPBS液95 DB37/T 494—2004附录（规范性附录）胚胎装管示意图棉塞冷冻液气泡冷冻液及胚胎气泡冷冻液注：胚胎装管方法：用0.25ml的专用细管，吸入约4cm长的冷冻液、0.5c长的气池、适量冷冻液及胚胎、0.5cm气泡、4cn冷冻液，封管。9 DB37/T 494—2004附录F（规范性附录）冷冻保护剂添加步骤F.1冷冻保护剂添加步骤F.1.1第一步：1/310%甘润冷冻液+2/3保存液，平衡10分钟：F.1.2第二步：2/310%甘油冷冻液+1/3保存液，平衡10分钟：F.1.3第三步：10%甘油冷冻液，平衡10分钟（从加入至放入冷冻室的时间）。乙二醇冷冻剂添加步骤：将经过洗涤的胚胎直接放入乙二醇冷冻剂，进行装管，平衡10分钟（从如入至放入冷冻室的时间）。10 DB37/T 494—2004附录G（规范性附录）甘油冷冻胚胎细管脱甘油方法G.1解冻液：1M的糖液+10%FCS-mPBS液G.2三步脱甘油法：G.2.1第一步：2/310%甘油冷冻液+1/3解冻液，平衡5分钟；G.2.2第二步：1/310%甘油冷冻液+1/3解冻液+1/3保存液，平衡5分钟G.2.3第三步：1/3解冻液+2/3保存液，平衡5分钟。然后将胚胎在保存液中洗涤3-5次，镜检胚胎质量、装管、移植。11 DB37/T 494—2004前言本标准附录A、B、C、D、E、F、G为规范性附录。本标准由山东省畜牧办公室、山东省畜牧业标准化技术委员会提出，本标准由山东省畜禽良种推广中心负责起草，本标准主要起草人：张志民、刘栋、王建英、胡洪杰。 DB37/T 494—2004牛胚胎移植技术规程1范围本标准规定了供受体牛的选择标准，牛胚胎移植的超数排卵、胚胎采集、冷冻、解冻、移植的技术要求。本标准适用于牛胚胎移植，2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB4143—84牛冷冻精液质量标准DB 37/T309-2002奶牛生产技术规程DB 37/T3072002肉牛生产技术规程DB 37/T3062002牛人工授精技术规程3术语和定义3.1供体提供胚胎的母牛。3.2受体接受供体胚胎并代之完成妊娠、分娩过程的母牛。3.3同期发情是指通过激素药物处理，将群体母牛从不同的发情周期调整到同一进程，使它们在预定的时间内集中发情。3.4超数排卵是在母牛发情周期的某一时期，用激素处理母牛，诱发卵巢比在自然情况下有较多的卵泡发育并排出多个有受精能力的卵子，4胚