DB37_T 3493-2019饲料原料玉米代谢能体外评定法.pdf

ICS 65. 120B25DB37山東东省地方标准DB37/T3493——2019饲料原料玉米代谢能体外评定法Determination of maizes metabolic energy in vitro method2019-01-29发布2019-03-01实施山东省市场监督管理局发布 DB37/T 3493—2019前言本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草本标准由山东省备牧兽医局提出并监督实施本标准由山东省畜牧业标准化技术委员会归口。本标准主要起草单位：山东农业大学。本标准主要起草人：林海、焦洪超、王晓剪、赵景鹏、杨景亮I DB37/T 3493—2019饲料原料玉米代谢能体外评定法1范围本标准规定了通过体外消化酶法和理化评定法进行饲料玉米代谢能评定的方法。本标准适用于饲料玉米代谢能测定，2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 5498粮油检验容重测定GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T 14699. 1饲料采样GB/T 17890饲料用玉米GB/T 20806饲料中中性洗涤纤维（NDF）的测定SB/T 10146HGT-1000型谷物容重器体外消化酶法3.1原理通过胃蛋白酶-胰蛋白酶体外消化玉米，根帮玉米体外干物质消失率与其代谢能的回归分析，建立玉米体外干物质消失率与代谢能的数学模型，将测得的玉米体外干物质消失率代入构建的数学模型，计算获得玉米的代谢能。3.2试剂或材料本标准所用试剂，未注明要求时，均使用分析纯试剂3.2.1水符合GB/T6682三级水的规定。3. 2. 2胃蛋白醇：≥250u/ng。3.2.3J胰蛋白醇：≥600u/ng。3.2.40.01mo1/L盐酸溶液：pH 2.0，0.31ml.盐酸，注入1000 mL水中。3. 2. 50.1mo1/L磷酸缓冲溶液：pH 7.6，31.26gNa,HPO,+12H,0和2.03gNaH,P0,*2H,0 分别溶解、混合，溶解于1000mL水中。3. 2. 61.0mo1/L氢氧化钠落液：4gNa0H，落解于100mL水中。3. 2. 71.0mg/mL胃蛋白酶溶液：0.1g胃蛋白酶（3.2.2），溶解于100mL0.01mo1/L盐酸溶液（3.2.4)中.3. 2. 82.5mg/ml胰蛋白酵溶液：0.25g胰蛋白酶（3.2.3），溶解于100ml0.1mo1/L磷酸缓冲溶液（3.2.5）中，使用前半小时配制。1 DB37/T 3493—20193. 2. 9透析袋：截留分子量12000D～14000D，使用前以水煮沸10min，清洗干净，于4C水中浸泡存放，90天内可用。3.3仪器设备3. 3. 1高速粉碎机：转速≥24000rpl。3. 3. 2鼓风干燥箱：RT+10℃~200℃，精度±0.5℃3. 3. 3分析天平：0.0001g3. 3. 4水溶恒温振荡器：RT+5℃～100℃，精度士0.5℃3.4采样按GB/T14699.1的规定进行采样。3.5测定步骤3.5.1玉米样品使用高速粉碎机（3.3.1）进行粉碎，至全部过0.25m筛，3.5.2粉碎后玉米样品于鼓风干燥箱（3.3.2）中，105C土2C烘至恒重。3.5. 3：准确称取烘干后玉米样品1.0g，置于50mL三角瓶中，准确加入1.0g/mL胃蛋白酵溶液（3.2.7）10mL，加盖密封，置于水浴恒温振荡器（3.3.4）中，37℃、振幅180r/min连续消化4小时。3.5.4在消化液中加入1.0mo1/LNa0H溶液（3.2.6）0.1ml~0.5ml中和，然后加入2.5mg/mL胰蛋白酵溶液（3.2.8）10ml，混合均匀后转移到透析袋（3.2.9）中，封口，放入盛有300mL磷酸缓冲液（3.2.5）的烧杯中，置于水浴恒温振荡器（3.3.4）中，37℃、振幅180r/min连续消化20小时。3. 5. 5取出透析袋，用水反复冲洗透析袋内消化渣6次以上，并将残渣全部转移至滤纸中，105℃士2℃烘至恒重，测定残渣的质量。3.5.6根据下述公式计算玉米的体外干物质消失率：DMD :M, M,(1)M,式中：DMD一待测玉米样品干物质消失率：M一待测玉米样品体外消化前的质量，g：M一待测玉米样品体外消化后的质量，g：3.6结果计算将待测玉米样品的体外干物质消失率（DMD）代入以下数学模型，计算得到玉米表观代谢能：AME(KJ/kg) = 358.42 × DMD + 1032.58(2)式中：AME一待测玉米样品的表观代谢能，KJ/kg：DMD一待测玉米样品干物质消失率。4数学模型套算法4.1原理2 DB37/T