PFGE分型技术原理以及标准仪器配置.pptVIP

PFGE分型技术原理以及标准仪器配置;目录;基本原理;基本原理;基本原理;与常规的直流单向电场凝胶电泳不同，这项技术采用定时改变电场方向的交变电源，每次电流方向改变后可持续 1s 到 5min 左右，然后再改变电流方向，反复循环，所以将其称之为脉冲式交变电场。目前PFGE装置有垂直脉冲场、电场翻转、旋转、钳位匀强电场（CHEF)等电泳系统。; PFGE方法用来研究细菌的分子流行病学特点，能够对全基因组进行 分析，最终分析的DNA超过90%，可以从整个基因组的角度考虑菌株 间的关系。 用稀有位点的限制性内切酶进行酶切可以获得菌种某亚种特有的电泳 图谱，是PFGE技术的显著优势。 灵敏、分型能力强：电场是不断改变的，有利于DNA的迁移 重复性好、分辨率高、结果稳定、易于标准化。“金标准” 相同的操作框架适用于多种菌，只需选择合适内切酶、优化电泳条件 即可。;参数设置; 脉冲时间是指电场在某个角度持续的时间。 脉冲场电泳的核心参数。通常实验中使用的脉冲时间为一个范围值，如：2－20S。 脉冲时间的变换可以是线性的或者是非线性的。 与电泳时间作区别，电泳时间通常为20hr左右，其根据是标准菌种H9812的20Kb片段距胶的下缘为1-1.5cm. ;脉冲时间—不同脉冲时间对带型的影响;随着电场夹角的减小，两个大片段DNA分离的更好。但同时小片段也在逐渐的压缩。