DB37_T 3787-2019水质　粪大肠菌群测定　光度法.pdf

ICS 13. 060Z 16DB37山 長东省地國方标准DB37/T 3787—2019水质粪大肠菌群测定光度法Water quality—determination of fecal coliformsphotometric method2019-12-24发布2020-01-24实施山东省市场监督管理局发布 DB37/T次前言.II范围2规范性引用文件3术语和定义4分光光度法5荧光法.. DB37/T 3787—2019前言本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草，本标准由山东省生态环境厅提出并组织实施本标准由山东省环保标准化技术委员会归口。本标准起草单位：山东省生态环境监测中心、青岛佳明测控科技股份有限公司、北京华夏科创仪器股份有限公司。本标准主要起草人：李恒庆、由希华、宗雪梅、王婷、王聪、郑球琳、邹康、潘光、周成、张芳、张爱芳。II DB37/T质粪大肠菌群测定光度法1范围本标准规定了测定水中粪大肠菌群的分光光度法和荧光法。本标准适用于地表水、生活污水和工业废水中粪大肠菌群的应急现场快速测定。本方法的检出限为30MPN/L，检测范围：30~10”MPN/L，检测周期不大于18h2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T14581水质潮泊和水库采样技术指导HJ/T91地表水和污水监测技术规范HJ494水质采样技术指导3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3. 1粪大肠菌群fecal coliforms44.5℃培养能发酵乳糖产酸产气的需氧及兼性厌氧革兰氏阴性无芽孢杆菌。3. 2最大可能数most probable number, MPN最大可能数（mostprobablenumber，缩写为MPN），又称稀释培养计数，是一种基于泊松分布的间接计数法。利用统计学原理，根据一定体积不同稀释度样品经培养后产生的目标微生物阳性数，查表估算一定体积样品中目标微生物存在的数量（单位体积存在目标微生物的最大可能数）。4分光光度法4.12方法原理-定量的水样与选择性培养基混合均匀放置于44.5℃环境下，粪大肠菌群产生B-半乳糖苷酶（β-D-galactosidase），并分解色原底物释放出色原体使培养基呈现颜色变化，通过连续分光光度（波长：300nm～600nm）测定，依据待测水样色度变化与水中类大肠菌群数成一定关系的原理，得出粪大肠菌群浓度。4.2干扰和消除1 DB37/T 378720194.2.1活性氯具有氧化性，能破坏微生物细胞内的酵活性，导致细胞死亡，可在样品采集（4.5.1）时加入硫代硫酸钠溶液（4.3.4）消除干扰。4.2.2重金属离子具有细胞毒性，能破坏微生物细胞内的酶活性，导致细胞死亡，可在样品采集（4.5.1）时加入乙二胺四乙酸二钠落液（4.3.5）消除干扰，4.3试剂和材料除非另有说明，分析时均使用符合国家标准的分析纯试剂。4.3.1粪大肠菌群检测试剂主要成分：蛋白陈：5g：硫酸锰：0.005g：硫酸镁：0.001g：硫酸锌：0.001g：磷酸盐：1.78g两性霉素B:0.60g：蒸馏水1000mL制法：上述试剂溶于蒸馏水中，充分混匀，调整pH值为7.27.4，68.95kPa(115℃)，高压灭菌20min，分装贮存于4C避光备用。注：也可采用市售商品化培养基制品。4. 3. 2硫代硫酸钠（Na;S,0+5H:0）。乙二胺四乙酸二钠（(CHμN:0Naz*2H:0)4. 3. 4硫代硫酸钠落液：p（Na;S.0,）=0.10g/mlL，称取15.7g确代确酸钠（4.3.2），落于适量水中，定容至100mL，临用现配。4. 3.5乙二胺四乙酸二钠（EDTA-Na,）溶液：p（CHN,0,Na;*2H,0）=0.15g/mL，称取15g乙二胺四乙酸二钠（4.3.3），溶于适量水中，定容至100mL，此溶液保质期为30d。4. 3. 6无菌水：取适量纯水，经121C高压蒸汽灭菌20min，备用。4.4仪器和设备4. 4.1采样瓶：具螺旋帽或磨口塞的100mL、250mL、500mL广口玻璃瓶。注：在采集不存在或不考患余氧、金属离子干扰的样品时，可采用市售无菌采样瓶或无菌采样袭4. 4. 2微生物快速检测仪：恒温培养单元：不少于2个温控系统，温度控制精度1℃，可自动调节待检测样本措养温度(44.5 ℃±1 ℃) :检测单元：不少于4个独立的检测系统，可实现多个样本的同时监测：数据显示、处理单元：自动输出检测结果，可查询和显示历史数据。4. 4. 3高压蒸汽灭菌器：121℃可调、101.3kpa。4. 4. 4量筒：50mL、