DB37_T 3674-2019饲料中维生素A、维生素D3、维生素E的同步快速测定　高效液相色谱法.pdf

ICS65.120B 46DB37山 東东省地國方标准DB37/T3674—2019饲料中维生素A、维生素D3、维生素E的同步快速测定高效液相色谱法2019-08-30发布2019-09-30实施山东省市场监督管理局发布 DB37/T次前言1范围2规范性引用文件3原理4试剂或材料5仪器设备6样品7试验步骤7.1提取7.2浓缩，7.3液相色谱参考条件7.4标准系列溶液.7.5测定8试验数据处理8.1维生素A乙酸酯含量8.2维生素D含量8.3维生素E乙酸酯含量9精密度附A（规范性附录）维生素A乙酸酯、维生素D、维生素E乙酸酯标准溶液浓度校正方法。附B（资料性附录）维生素A乙酸酯、维生素D,和维生素E乙酸酯标准溶液的高效液相色谱图 DB37/T言本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草，本标准由山东省畜牧兽医局提出并监督实施。本标准由山东省畜牧业标准化技术委员会归口。本标准起草单位：山东省饲料质量检验所、青岛市华测检测技术有限公司。本标准主要起草人：强莉、吕明春、刘雪芹、李斌、宫玲玲、李俊玲。1I DB37/T料中维生素A、维生素D3、维生素E的同步快速测定高效液相色谱法1范围本标准规定了饲科中维生素A乙酸酯、维生素D、维生素E乙酸酯测定的高效液相色谱方法。本标准适用于复合预混合饲料、维生素预混合饲料中维生素A乙酸酯、维生素D、维生素E乙酸酯的测定。其他饲料可参照执行。本方法定量限：维生素A乙酸酯为10000IU/kg：维生素D,为40000IU/kg：维生素E乙酸酯为100mg/kg-2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件，凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T14699.1饲料采样GB/T20195动物饲料试样的制备3原理试样中的维生素A乙酸酯、维生素D,和维生素E乙酸酯用二甲基亚风(DMSO)超声溶解，经正已烷率取、浓缩、复落后，供高效液相色谱仪测定，外标法定量。4试剂或材料除非另有规定，仅使用分析纯试剂，4.1水：GB/T 6682，—级。4.2正已烷。4.3二甲基亚虱（DMS0）：色谱纯。4.4甲醇：色谱纯。4.5维生素A乙酸酯标准储备溶液（1mg/mL）：称取维生素A乙酸酯标准品（CAS：127-47-9，纯度保存，有效期为3个月。临用前利用紫外分光光度计检测其吸光度值，计算其准确浓度。（校正方法见附录A）4.6维生素D,标准储备溶液（1mg/mL）：称取维生素D,标准品（CAS：67-97-0，纯度不低于99.0%）50mg(准确至0.01g）于50mL棕色容量瓶中，用甲醇(4.4)溶解定容。置-18C冰箱避光保存。有效期为3个月。临用前利用紫外分光光度计检测其吸光度值，计算其准确浓度。（校正方法见附录A）：1 DB37/T 367420194.7维生素E标准工作落液（1g/mL）：称取DL-a-生育酚乙酸酯标准品（CAS：7695-91-2，纯度不低于99.0%）50mg（准确至0.01mg)于50mL棕色容量瓶中，用甲醇（4.4)溶解定容。置-18℃冰箱避光保存。有效期为3个月。临用前利用紫外分光光度计检测其吸光度值，计算其准确浓度。（校正方法见附录A）4.8维生素A标准工作液：准确吸取1.00L的维生素A标准储备液（4.5）于10mL棕色容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀。维生素A标准工作液浓度为100g/mlL。于-18℃保存，有效期为半个月。4.9维生素D,标准工作液：准确吸取0.50mL维生素D标准储备液（4.6）于10mL棕色容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀维生素D标准工作液浓度为50μg/mL。于-18℃保存，有效期为半个月。4.10析相分离纸：1PS.4. 11微孔滤膜：0.22μⅢ，有机相。5仪器设备5.1高效液相色谱仪：配有紫外或二极管阵列检测器。5. 2F电子天平：感量为0.1 mg和0.01g5.3紫外分光光度计。5.4超声波振荡器。5.5振荡器：频率不低于250次/min5.6J旋转蒸发器。5.7氮吹仪。5. 8平底烧瓶（具塞）：棕色500ml。6样品按GB/T20195制备试样，取不少于250g样品，全部过1.0mm孔径分析筛，筛上物不大于3%，混合均匀后，装入密闭容器中，于28℃避光保存，7试验步骤7.1提取在超声波水浴中超声提取30min（水温不宜超过35度：中间旋摇2～3次以防样品附着瓶底）：取出放置冷却。注：在加入DMSO的过程中，小心试样结块，先倒入少许DMISO，报据烧瓶，将试样据匀，再将剩余DMSO沿烧瓶壁冲洗，使附看在内坚的试样全部冲洗到烧瓶的低部待冷却至