基因表达分析技术.pptVIP

双 向 电 泳 技 术 Two-dimemsional gel electrophoresis, 2DE 技术构成： 第一相：IEF 采用丙烯酰胺与不同PH的两性 电介质形成的固定的PH梯度– IEF- PAGE 第二相：分子筛凝胶 SDS- PAGE 特点： 1. 一次分离细胞中几乎所有的蛋白质（以spot形式出现） 2. 高灵敏度和高分辨率 用银染条件下，可达10-15——10-18 mol水平 3. 便于计算机分析处理 电泳分离图谱经扫描输入计算机，可以进行蛋白质定位, 等电点,分子量定量 不同条件下的图谱进行比较,建立蛋白质组数据库 质 谱 技 术 质谱仪 进样系统 离子源 质量分析器 离子探测器系统 在蛋白质组学研究中常用的质谱仪 电喷雾离子化质谱仪（ESI-MS） 基质辅助的激光解吸离子化－飞行时间质谱仪 （MALDI-TOF-MS） 四极杆-TOF质谱仪（Q-TOF） 质谱技术在蛋白质组研究中的作用 1. 肽质谱和肽的序列分析 2. 翻译后修筛的蛋白质鉴定 N端封闭，磷酸化，糖基化 3. 其它： 蛋白质二硫键的定量和定位 蛋白质——蛋白质相互作用的分析 蛋白质——其它分子相互作用的分析 蛋白