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- 2023-07-31 发布于上海
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研究基因功能的方法基因功能的研究思路主要包括:
基因的亚细胞定位和时空(发育期或梯度药物处理浓度 ,不同组织/器官)
表达谱;
基因在转录水平的调控(可以通过 genomewalkingPCR 或通过已有的资源库寻找该基因的启动子等转录调控区域,通过单杂交或 ChIP 等技术,寻找该基因的转录调控蛋白)
细胞生化水平的功能研究(也就是蛋白蛋白作用复合体的寻找验证 ,具体方法有酵母双杂交,GSTpulldown,co-IP,BRET,FRET,BiFc 等等,对该基因的表达产物做一个细胞信号转导通路的定位)
gain-of-functionloss-of-function:也就是分别在细胞和个体水平,做该基因的超表达和 knockdown(或 knockout),从表型分析该基因的功能.
功能研究应从完整的分子-细胞-个体三个层次研究,综合分析. 关于基因的表达和定位,可以这样去做:
mRNA 水平检测基因表达:选择表达目的基因的组织/细胞(发育不同时期、机体不同部位、加处理因素...),提取RNA,反转录,做RT-PCR 或realtimeRT-PCR,检测基因的表达情况/变化。
(或者以 northernblot、Rnaseprotectionassay 方法,检测基因的 mRNA
表达情况/变化。)
蛋白质水平检测基因表达:选择相应的组织/细胞,以 Westernblot、免疫
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