研究基因功能的方法.docxVIP

  • 68
  • 0
  • 约小于1千字
  • 约 1页
  • 2023-07-31 发布于上海
  • 举报
研究基因功能的方法基因功能的研究思路主要包括: 基因的亚细胞定位和时空(发育期或梯度药物处理浓度 ,不同组织/器官) 表达谱; 基因在转录水平的调控(可以通过 genomewalkingPCR 或通过已有的资源库寻找该基因的启动子等转录调控区域,通过单杂交或 ChIP 等技术,寻找该基因的转录调控蛋白) 细胞生化水平的功能研究(也就是蛋白蛋白作用复合体的寻找验证 ,具体方法有酵母双杂交,GSTpulldown,co-IP,BRET,FRET,BiFc 等等,对该基因的表达产物做一个细胞信号转导通路的定位) gain-of-functionloss-of-function:也就是分别在细胞和个体水平,做该基因的超表达和 knockdown(或 knockout),从表型分析该基因的功能. 功能研究应从完整的分子-细胞-个体三个层次研究,综合分析. 关于基因的表达和定位,可以这样去做: mRNA 水平检测基因表达:选择表达目的基因的组织/细胞(发育不同时期、机体不同部位、加处理因素...),提取RNA,反转录,做RT-PCR 或realtimeRT-PCR,检测基因的表达情况/变化。 (或者以 northernblot、Rnaseprotectionassay 方法,检测基因的 mRNA 表达情况/变化。) 蛋白质水平检测基因表达:选择相应的组织/细胞,以 Westernblot、免疫

文档评论(0)

1亿VIP精品文档

相关文档