苏云金芽胞杆菌cry8E基因转录调控机制研究的开题报告.docxVIP

苏云金芽胞杆菌cry8E基因转录调控机制研究的开题报告 一、选题背景 苏云金芽胞杆菌（Bacillus thuringiensis，简称Bt）是一种常见的杆状芽孢杆菌，具有广泛的生物杀虫特性，可用作农业生产中的昆虫杀灭剂。其中，cry8E基因编码的毒素具有高效杀灭蓟马等害虫的特性。而cry8E基因表达与调控机制的研究，可为优化Bt的生产及其应用提供理论基础。 二、研究问题及目的 1.研究cry8E基因在Bt中的表达及其调控机制； 2.明确cry8E基因转录的调控因素及其作用机制； 3.探究cry8E基因表达对Bt菌株生理生化特性的影响。 三、研究方法 1.从Bt菌株中提取基因组DNA，在PCR扩增和测序的基础上，设计cry8E基因的启动子、转录因子及其结合位点等关键序列； 2.构建cry8E基因启动子-荧光素基因报道片的表达载体，经电转化构建成Bt表达菌株； 3.采用Western blotting、RT-qPCR等实验方法，分别检测cry8E基因蛋白及mRNA在Bt菌株中的表达情况； 4.利用定量荧光PCR技术及信号转导路径筛选体系，识别cry8E基因转录调控因子及其作用机制，并验证其在cry8E基因表达中的作用； 5.通过分析cry8E基因诱导对Bt菌株生理生化特性的影响，研究cry8E基因在Bt菌株代谢途径重分布、细胞膜电位变化、能量代谢等方面的作用机制。 四、研究意义 1.揭示cry8E基因在Bt中的表达及其调控机制，进一步优化Bt的生产及应用效果； 2.丰富cry8E基因调控途径的研究，为探究其他Bt毒素基因的表达及调控提供参考； 3.探究cry8E基因表达对Bt菌株果仁代谢、能量代谢等方面的影响，可为Bt菌株代谢途径、生理生化机制的研究提供理论支持。