DB37_T 2275-2013辣椒疮痂病诊断及检测技术标准.pdf

ICS 65. 020B 16DB37山東东省地方标准DB37/椒疮痧病诊断及检测技术标准he standard for diagnosis and prediction of Chili bacterial scab201304-01发布2013-05-01实施山东省质量技术监督局发布 DB37/T言本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。本标准由山东省农业标准化技术委员会提出并归口。本标准起草单位：山东农业大学。本标准主要起草人：张修国、李壮、马立国。I DB37/T 2275—2013辣椒疮痧病诊断及检测技术标准1范围本标准规定了辣椒疮痴病病害诊断及检测技术。本标准适用于辣椒疮癫病不同生育期症状描述，病菌分离培养及保存技术，病菌形态学描述，致病性测定技术，病害流行与气候因子关系分析，病菌分子检测技术。2术语和定义下列术语和定义适用于本文件，2. 1辣椒疮病chili bacterial scab又称细菌性斑点病，由野油菜黄单胞杆菌疮痴致病变种(Xanthowonascanpestrispv.vesicaoria（Doidge.）Dowson）引起的细菌性病害，主要危害辣椒叶片、茎蔓及果实。2. 2病状symptom of a disease辣椒病部所显示的异常特性，如叶片正面呈黄绿色不规则斑块，无清晰边缘。2. 3接种体inoculum用于接种以引起辣概抢痴病的病原物或病原物的一部分。2. 4接种悬浮液inoculum suspension用于辣椒疮痴病接种含有定量接种体的液体，2. 5人工接种artificial inoculation在适宜条件下，通过人工操作将接种体置于辣概适当部位并使之发病的过程。2. 6致病性pathogenicity病原物所具有的破坏寄主和引起植物发生病变的能力。2. 7 DB37/T 2275—2013病情指数diseaseindex（DI)病情指数（缩写为D1）又叫发病指数、感染指数，与发病率一样是表示发病程度的一种方法。发病率是指一个群体中发病的多少，用百分率表示，病情指数（DI)是根据一定数目的植株或植株器官各病级（把植株或植株某一器官感染病害轻重程度划分为等级称为病级）核计其发病株（器官）数所得平均发病程度的数值。3仪器及试剂带光源显微镜（100x～1000x)、乳酚油、乳酚油配制：苯酚结晶（水溶加热溶化）20mL、乳酸20mL、甘油40mL，蒸馏水20mL混合而成，载玻片，盖玻片。4辣椒疮痴病病状与病征见附录A。5辣椒疮痴病病原诊断辣椒范珈病病菌特征见附求A。6辣椒疮病菌鉴定与致病性测定6. 1病叶症状观察和病菌初步诊断见紧田间可病叶、病果等是否有辣椒病斑，然后利用喷菌试验（见附录A），检测可叶片中是否有细菌存在。如有喷菌现象可初步怀疑发病部位为孢病菌侵染。6.2标本采集与制作采集具典型症状的辣椒疮痴病病害标本，尽可能采集到不同辣椒品种、不同发病时期、不同地理区域及不同发病部位的辣概疮痴病标本。注明标本采集时间、地点等，敷半透明盖纸，装入标本盒内。病果标本装入吸水纸装，迅速放入4亡冰柜内临时保存，以便分离获得菌株6.3菌株分离鉴定6.3.1菌株分离鉴定采集具有典型辣椒范病斑辣椒病叶，取约4Ⅲ见方小块病组织，经表面消毒和灭菌水洗过3次以后，研碎后用移菌环截取以上组织液于灭菌LB（YDC或YDA）（见附永B)培养基上划线分离或培养血稀释分离，分离纯化获得纯培养物，经生物学特性和、形态学及革兰氏染色（见附永A）鉴定确认为野油菜黄单胞杆菌疮痴致病变种（anthamonascapestrispv.vesicaoria）后直接用于接种或扩繁备用。6.3.2接种体繁殖在接种前对辣概疮痴病菌接种体进行繁殖，为保证菌株活力，病组织在水中磨碎，滤去粗的植物组织，离心后用下面浓缩细菌浮液针刺接种辣粮组织，从发病后新病斑上分离、紫殖，也可将分离纯化的菌株接种于健康辣椒叶片上，发病后再从接种的组织上分离，6.4致病性测定6.4.1接种期与接种浓度2 DB37/T 2275—2013浓度为180g/mL的氯毒素后培养1h。细菌记数，用细胞悬浮TE将细菌浓度调到5×108CFU/mL。6.4.2接种方法利用1Ⅲ注射针对健康辣椒叶片表皮厚的部位组织进行穿剃接种，6.4.3接种后管理接种后将辣椒置于保湿桶内保湿3d，温度15℃30℃，第4d揭盖，夜间保湿，第8d调查发病情况。6.4.4辣椒疮痴病致病性测定辣椒疮痴病菌与附录性资料A中病害症状有关，该病害发生与辣概疮痴病菌存在有关：从病组织中分离获得该病菌纯培养，观察其生物学形状、理化性状及菌体形态学特征，然后将培养的菌种接种于健康辣概叶片上，诱发产生典型辣概疮痴病症状，从接种后发病叶片上，再分离获得纯的辣椒疮