SZDB_Z 129-2015 蓝舌病病毒抗体检测竞争酶联免疫吸附法.pdfVIP

ICS 11.220 B 41 SZDB/Z 深圳市标准化指导性技术文件 准 SZDB/Z 129—2015 蓝舌病病毒抗体检测 竞争酶联免疫吸附法 Detection of antibody against Bluetongue virus Competitive immunoenzymatic assay 2015-02-27 发布 2015-03-01 实施 深 圳 市 市 场 监 督 管 理 局 发布 1 SZDB/Z 129—2015 蓝舌病病毒抗体检测 竞争酶联免疫吸附法 1 范围 本标准规定了检测蓝舌病病毒抗体的竞争酶联免疫吸附试验及试剂制备方法。 本标准适用于蓝舌病病毒抗体检测、流行病学调查和免疫监测。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 SN/T 2123 出入境动物检疫实验样品采集、运输和保存规范 《中国兽药典》第三部附录 3.检测原理 酶联免疫吸附试验是由酶分子与抗体分子共价结合形成酶标记抗体，此种结合不会改变抗体的免疫 学特性，也不影响酶的生物学活性。通过此种酶标记抗体与吸附在固相载体上的抗原发生特异性结合， 当加入底物溶液后，底物可在酶作用下使其所含的供氢体由无色的还原型变成有色的氧化型，从而出现 显色反应，此种显色反应可通过酶标仪进行定量测定，从而通过底物的显色反应来判定有无相应的免疫 反应。本标准中被检血清和蓝舌病病毒VP7蛋白特异性单克隆抗体先后加入已用蓝舌病病毒 VP7蛋白包 被的96 孔酶标板孔内，二者竞争与孔内特异性包被抗原结合，加入酶标辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠 IgG，洗涤后，然后加入底物显色。待检血清中蓝舌病病毒特异性抗体含量越高，则特异性单克隆抗体 与包被抗原结合的就相对少，显色越浅；反之，显色越深。使用酶标仪测定反应物的OD450值，计算抑 制百分率（PI），根据PI值判定试验结果。 4 缩略语 下列缩略语适用于本文件。 AcNPV：苜蓿银纹夜蛾核多角体病毒。 BT：蓝舌病。 BTV：蓝舌病病毒。 1 SZDB/Z 129—2015 BTV VP7：蓝舌病病毒的VP7内壳蛋白。 c-ELISA：竞争酶联免疫吸附试验。 ELISA：酶联免疫吸附试验。 HRP：辣根过氧化物酶。 McAb：单克隆抗体。 McAb-BTV VP7：蓝舌病病毒VP7蛋白特异性单克隆抗体。 OD：光密度。 PI：抑制百分率。 r/min：转速单位，转/分。 SDS：十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳。 5 试剂和材料 a)包被液、洗涤液、稀释液、底物液、终止液,配制方法见附录A。 b)包被抗原为蓝舌病病毒VP7蛋白。 c)BTV VP7蛋白特异性单克隆抗体。 d)标准血清：蓝舌病病毒阳性血清对照品、弱阳性血清对照品、阴性血清对照品，由世界动物卫生 组织（OIE）参考实验室或中国农业部指定实验室提供。 e) 辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠IgG （羊抗鼠IgG-HRP）。 f) 96孔酶标板。 6 主要设备 酶标仪。 单通道、多通道可调微量移液器。 恒温箱。 ELISA洗板机。 二氧化碳培养箱。 紫外分光光度计。 超声波破碎仪。 7 BTV V