DB37T 666-2007饲料中地西泮的测定 液相色谱质谱联用法.pdf

ICS:65.120B20DB37山东省地方标准DB37/T 6662007饲料中地西泮的测定液相色谱质谱联用法Determination of diazepam in feeds by LC-MS2007-03-09发布2007-05-01实施山东省质量技术蓝督局发布 DB37/T 666—2007前言本标准的附录A、附录B均为资料性附录。本标准由山东省备牧办公室提出。本标准由山东省畜牧业标准化技术委员会归口。本标准起草单位：山东省饲料监察所。本标准主要起草人：汤文利、梁萌、任爱丽、陈淑沂， DB37/T 666—2007饲料中地西洋的测定液相色谱质谱联用法1范围本标准规定了用高效液相色谱-质谱联用(LC-MS)测定饲料中地西洋的方法。本标准适用于配合饲料、浓缩饲料和添加剂预混合饲料中地西洋的测定。本标准高效液相色谱最低定量限为1mg/kg，质谱最低确证限为1mg/kg。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款.凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T20195动物饲料试样的制备3原理试样用液液萃取，经固相萃取柱净化，用反相液相色谱柱分离后，紫外检测器检测，外标法定量。并采用质谱检测器以地西洋的质量色谱峰保留时间和特征离子确证。4试剂除非另有规定，仅使用分析纯试剂．水符合GB/T6682一级水的规定。4.1甲醇，色谱醇。4.2乙腊，色谱醇4.3乙酸.4.47碳酸钠溶液：（Na;C0,）=100g/L。4.5提取液：正已烷十二氯甲烷=7+3。4.6乙酸铵溶液：c(CH;C00NH)=25mmo1/L.准确称取1.927g乙酸铵，用水溶解、加入2mL乙酸（4.3），用水定容至1000ml，过0.45μm的微孔滤膜。4. 72流动相：乙睛（4.2）+乙酸铵溶液（4.6）=45+55。用前超声脱气5min。4.8地西洋标准溶液。4.8.1地西洋标准贮备液（100μg/mL）称取0.010地西洋标准品，精确至0.1mg（含量≥99.0%），用甲醇（4.1)溶解、定容至100ml。4.8.2地西洋标准工作液准确移取地西洋标准忙备液（4.8.1），用甲醇（4.1）定容，配制成1.00μg/ml、5.00μg/mL、10. 0 μ g/mL, 20. 0 μ g/mL, 30. 0 μ g/mL,40. 0 μ g/mL,50.0μg/mL的标准工作液5仪器5. 1实验室用样品粉碎机。5.2分析天平：感量0.1mg。5.3离心机：4000r/min.5.4超纯水器。 DB37/T 666—20075.5超声波清洗器。5.6旋涡混合器。5.7具盖塑料离心管：100mL。5.8硅酸镁固相苯取小柱：200mg3mL.5.9高效液相色谱仪，具紫外检测器。5.10离子研质谱仪。6试样的制备按GB/T20195规定执行。分析步骤7.1提取称取试料约2g（精确至0.1mg）于离心管（5.7）中，加水20mL，用碳酸钠溶液（4.4）调pH至89，准确加入提取液（4.5）15.00mL，轻摇数秒，加盖密封，旋涡（5.6）混匀数秒，放气：旋涡混勾30秒两次：离心机（5.3）4000r/min离心5分钟：吸取上清液于具塞试管中。再准确加入提取液（4.5）15.00mL，重复上述操作，合并两次上清液，旋涡混勾。7.2净化准确移取上述试液适量（配合饲料取15.00mL、浓缩饲料取6.00ml、添加剂预混合饲料取3.00mL），注入已用甲醇（4.1）2ml和提取液（4.5）3mL处理过的硅酸镁固相萃取小柱（5.8），液体的过柱速度为成滴滴下，用水3mL淋洗，再用2.00mL甲醇（4.1）洗脱，收集洗脱液。调整甲醇（4.1）用量，使洗脱液中地西洋的浓度在1.00μg/mL-50.0μg/mL之间，旋涡混匀过0.2μm微孔滤膜，待测。7.3测定7.3.1色谱参考条件色谱柱：Cis柱，250mmX4.0mm，id，5μm，或性能类似的分析柱。柱温：室温。检测器：紫外检测器，检测波长254nm。流动相：乙腈+乙酸铵溶液=45+55流速：1mL/min.进样量：20μL.7.3.2定量用紫外检测器测定标准工作液（4.8.2）和洗脱液（7.2）中地西洋峰面积的响应值，用多点校准法定量。7.4确证7.4.1质谱参考条件色谱柱：C柱，250mm×4.0mm，id，5μm，或性能类似的分析柱。柱温：室温。流动相：乙精+乙酸铵落液=45+55。流速：0.2mL/min进样量：20μL离子化模式：正离子化，电喷雾电离源（ESI+），地西洋