SNT 2094-2008进出口食品中α-硫丹和β-硫丹残留量的检测方法 酶联免疫法.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 2094-2008进出口食品中α-硫丹和β-硫丹残留量的酶联免疫法检测方法Determination of α-endosulfan and β-endosulfan residuesin foodstuff for export and import-Enzyme linked immunosorbent assay method2009-02-01实施2008-07~17 发布中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局全拨器1惑童询真体数码防伪 SN/T 2094—2008前言本标准附录 A和附录 B为规范性附录,附录 C和附录 D为资料性附录本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国天津出人境检验检疫局、天津科技大学。本标准主要起草人：郑文杰、王硕、张宏伟、张燕、贺艳、刘炬、林安清、赵卫东、魏亚东、吴延晖。本标准系首次发布的出人境检验检疫行业标准。 SN/T 2094--2008进出口食品中α-硫丹和β-硫丹残留量的检测方法酶联免疫法1范围本标准规定了进出口食品中α-硫丹和β硫丹总残留量的酶联免疫测定方法。本标准适用于粮谷、蔬菜、茶叶、烟草、水果、肉及肉制品、虾中硫丹残留量的筛选检测。鱼类不适用酶联免疫法的测定，用胶体金试纸条法测定方法见附录B2测定方法2.1方法提要用甲醇或丙酮提取样品中α-硫丹和β硫丹用竞争性酶联免疫法进行检测。2.2试剂和材料除另有要求外,所有试剂均为分析纯；水为二次蒸馏水。2.2.1 甲醇。2.2.2 丙酮。亚铁氰化钾0.36mol/l2. 硫酸锌溶液 1.04 mol/I2.2.5磷酸氢二钠(NazHPO4·12H²O)。磷酸二氢钠（NaH,PO4·HOの).7氯化钠。2.2.8无水醋酸钠。2.2.9β环糊精。2.2.10过氧化氢脲。2.2.113,3,5,5-四甲基对三氨基联苯二甲基亚砜。2. 2. 12磷酸盐缓冲液（pH7.）:见附录 A.14吐温-20。无水硫酸钠：650℃灼烧4h,在干燥器内冷却至室温，贮于密封瓶中备用。2.2. 152. 2. 160.5%鱼皮胶水溶液(保存4℃保存）。掩蔽剂稀释液：0.5%鱼皮胶：磷酸盐缓冲液（1：20，体积比)稀释，于使用时配制。2.2. 173溶液I：甲醇：掩蔽剂稀释液（1：10,体积比）。.19酶标记物：辣根过氧化物酶和半抗原的结合物，4℃保存，于使用时用磷酸缓冲液40倍稀释，酶标物稀释8 h 后不能继续使用。2.2.20洗涤液，见附录 A。2.2.21 底物液 A,见附录 A。2.2.22 底物液,B,见附录 A。2.2.23终止液:硫酸 1.25 mol/L。2.2.24α、β-硫丹混合标准品（英文名称：α、βEndosulfan、CAS代码：115-29-7）：纯度大于等于99.5%。2.2.25标准品贮备液：配制成1μg/mL甲醇贮备液，一20℃保存。1 SN/T 2094—2008低温保存试剂，放置于室温不要超过4h，使用时，各溶液应达到室温。2.3仪器和设备2.3.1粉碎机。2.3.2旋涡混合器。2.3.3气浴摇床。2.3.4酶标仪。2.3.5市售硫丹检测试剂盒。2.3.6氮吹仪。2.3.7单道微量加样器:20 μL,100 μL,200 μI。2.3.8多通道微量加样器200 μL。2.4　制样2.4.1蔬菜（大白菜、蒜、葱、蒿蒿、小松菜、甘蓝（绿、紫）、卢笋、姜、菠菜、胡萝卜、芹菜）：称取5g（精确到0.01g)粗粉碎样品到玻璃瓶中,加人25 mL甲醇，机械振荡（250 r/min)1 h。室温静置分层，吸取200μL上清液用掩蔽剂稀释液稀释10倍后进行测定，胡萝卜稀释15倍；芹菜稀释20倍。2.4.2粮谷（红豆、绿豆、毛豆、花生）：称取10g（精确到0.01g）粗粉碎样品到玻璃瓶中，加人50mL甲醇，机械振荡（250r/min)1h。室温静置分层，吸取200μL上清液用掩蔽剂稀释液稀释20倍后进行测定。2.4.3茶叶：称取5g（精确到0.01g)粗粉碎样品到玻璃瓶中，加人25ml甲醇，机械振荡（250r/min）提取1h。室温静置分层，吸取100uL上清液用掩蔽剂稀释液稀释900倍后进行测定。2.4.4烟草：称取10g(精确到0.01g)粗粉碎样品到玻璃瓶中，加人50mL甲醇，机械振荡（250r/min)1h。静置10min，吸取100μL上清液用掩蔽剂稀释液稀释200倍后进行测定。2.4.5肉类（牛肉、羊肉、鸡肉）：称取10g（精确到0.01g)粗粉碎样品到玻璃瓶中，加人20ml甲醇，涡旋剧烈混合2min，过滤，吸取200μL上清液用掩蔽剂稀释液稀释10倍后进行测定。2.4.6虾：称取10g(精确到0.01g)待测样，搅碎后加人20g无水硫酸钠