SNT 1962-2007食品中克雷伯氏菌检测方法.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 1962-—2007食品中克雷伯氏菌检测方法Detection of Klebsiella in food2007-08-06 发布2008-03-01实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局数码防伪 SN/T 1962-2007前言本标准的附录 A和附录 B均为规范性附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国天津出人境检验检疫局。本标准主要起草人：高旗利、张霞、张海滨、郑文杰、罗茂凰、张海英、黎经。本标准系首次发布的出人境检验检疫行业标准。 SN/T 1962-—2007食品中克雷伯氏菌检测方法1范围本标准规定了食品中克雷伯氏菌(肺炎克雷伯氏菌、产酸克雷伯氏菌)的检测方法。本标准适用于食品中克雷伯氏菌(肺炎克雷伯氏菌、产酸克雷伯氏菌)的检测。2分类及定义2.1分类克雷伯氏菌（Klebsiella)为肠杆菌科的一个属。根据伯杰氏细菌分类法，将克雷伯氏菌属分成5个种：肺炎克雷伯氏菌（K.pneumonile）产酸克雷伯氏菌/催娩克雷伯氏菌（K.oαytoca）、植生克雷伯氏菌（K.planticola）、土生克雷伯氏菌（K.terrigena）和解鸟氨酸克雷伯氏菌（K.ornithinolytica）。其中肺炎克雷伯氏菌又分成3个亚种：肺炎克雷伯氏菌肺炎亚种（K.subsp.pneumoniae）、肺炎克雷伯氏菌臭鼻亚种（K.subsp.azaenae)和肺炎克雷柏氏菌鼻硬结亚种（K.subsp.rhinoscleromatis），为了方便，习惯上称谓肺炎克雷伯氏菌、臭鼻克雷循氏菌和鼻硬结克雷伯氏菌。由于植生克雷伯氏菌、土生克雷伯氏菌和解鸟氨酸克雷伯氏菌不具卫生学意义，因此，本标准界定的克雷伯氏菌仅包括肺炎克雷伯氏菌肺炎亚种、肺炎克雷伯氏菌臭鼻亚种、肺炎克雷伯氏菌鼻硬结亚种和产酸克伯氏菌。2.2　定义符合肠杆菌科定义，具荚膜、无鞭毛的革兰氏阴性球杆菌,大小（0.5 μm～0.8 μm）×（1 um～2 μm),单独、成双或短链状排列。发酵眠醇或阿东醇,不产生 H,S和鸟氨酸脱羧酶。3设备和材料3.1培养箱:35℃～37℃。吸管:1 mL,分刻度 0.1 m3. 2试管:17 mmX170 mm,15lmm×100 mrl3.33.415 mm×150 mm灭菌平m3.5接种环:3 mm 直径。3.6天平:量程2 kg，感量0.1 g。灭菌的样品处理器具：取样勺，剪风,开罐器。3.73.8克雷伯氏菌质控菌株：ATCC13883。3.9胃式拍打器或均质器。API20 E肠杆菌和其他革兰氏阴性杆菌鉴定试剂盒或类似产品。3.10VITEK全自动微生物分析系统或类似设备。3.114培养基和试剂除另有规定外，所用试剂均为分析纯,水为蒸馏水。4.1缓冲蛋百陈水(BPW）)：见附录第 A.1章。4.2肠杆菌增菌肉汤(EE肉汤）:见附录第 A.2章。4.3麦康凯肌醇阿东醇羧苄青霉素琼脂(MIAC)：见附录第A.3章。4.4氧化酶试验试剂:见附录第 A.4章。4.5营养琼脂(NA)：见附录第 A.5章。 SN/T 1962-—20074.6　动力试验培养基:见附录第 A.6 章。4.7吲哚试验培养基及试剂：见附录第A.7章。4.8吐温-80。5检测5.1方法提要食品中克雷伯氏菌的定性检测方法是通过对25g(mL)样品进行预增菌、选择性增菌、分离及生化鉴定等方法对食品中可能存在的克雷伯氏菌进行定性检测。定量检测采用9管MPN 法。5.2检测程序克雷伯氏菌的检测程序见图1。样品25 g(mL)225 mL的灭菌生理盐水225mL的缓冲蛋白陈水(BPW)36℃±1℃ 18 h~22 h10mL缓冲蛋白陈水(BPW)3×3管10 mL加入90 mL肠杆菌增菌肉汤(EE肉汤)36℃±1℃ 18 h～22 h36℃±1℃ 18 h~22 h10 mL肠杆菌增菌肉汤(EE肉汤)36℃±1℃ 18 h~22 h接种MIAC平板36℃±1℃ 18 h～22 h动力试验荚膜染色革兰氏染色氧化酶试验API 20E或VITEK一报告图1克雷伯氏菌的检测程序5.3定性检测5.3.1按无菌操作取检样25g(25mL)至225mLBPW中，振摇使样品充分拍打或均质，36℃±1℃培养 18 h～22 h。5.3.2移取培养 18 h～22 h 的悬液10 mL加人90 mLEE 肉汤中,36℃±1℃培养 18 h～22 h。5.3.3从选择性增菌的 EE肉汤中用直径 3mm 的接种环四区法接种于 MIAC平板,36℃士1℃培养18 h～22 h。观察平板上的菌落形态,在 MIAC平板上，克雷伯氏菌的菌落形态为圆形、突起、湿润、光滑的红色菌落,直径为 2 mm～4 mm。5.3.4从MI