SNT 2368-2009番茄斑萎病毒检疫鉴定方法.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 2368—2009番茄斑萎病毒检疫鉴定方法Quarantine identification of tomato spotted wilt virus2009-09-02发布2010-03-16实施中华人民共和·国发布国家质量监督检验检疫总局 SN/T 2368--2009前言本标准的附录 B、附录 C、附录 D、附录 E均为规范性附录,附录 A 为资料性附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准由中华人民共和国辽宁出人境检验检疫局、中华人民共和国天津出入境检验检疫局负贵起草。本标准主要起草人：王秀芬、姜丽、刘伟、刘跃庭、王有福、刘善斌、周铭。本标准系首次发布的出人境检验检疫行业标准。 SN/T 2368--2009番茄斑萎病毒检疫鉴定方法1范围本标准规定了进境植物检疫中对番茄斑萎病毒的检疫鉴定方法。本标准适用于所有进境种子、苗木等植物性繁殖材料中番茄斑萎病毒的检疫鉴定。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。SN/T2122　进出境植物及植物产品检疫抽样3原理3.1学名与分类地位学名: Tomato spotted wilt virus缩写：TSWV分类地位：布尼安病毒科（Bunyaviridae），番茄斑萎病毒属（Tospovirus）。3.2检疫鉴定依据番茄斑萎病毒的血清学特性、分子生物学特性和生物学特性是检疫鉴定的主要依据。其他资料参见附录 A。仪器设备、用具及试剂44.1仪器设备酶联检测仪、天平（感量，1/10000g）、pH计、微量榨汁机、PCR仪、电泳仪、电泳槽、凝胶成像系统、隔离温室、恒温水浴、低温冰箱等。微量移液器（2 μL,10 μL,20 μL,100 μL,200μL,1000 μL）、酶联板、研钵、eppendorf 管、花盆、消毒土等。4.2试剂酶联免疫吸附测定试剂（见附录B)、RT-PCR检测试剂（见附录 C）。5抽样与样品制备5.1抽样抽样按照SN/T2122的规定执行。5.2种子样品制备将种子(重点挑取畸形、不成熟的种子)播于灭菌土中，于 25℃生长并进行症状观察。待长出3片～4片叶后将表现症状的植株编号，未表现症状的植株分组(10株为1组)并编号。采集叶片用于酶联免疫测定、RT-PCR检测及生物学测定。5.3苗木样品制备将苗木种植于隔离温室中，于 25℃生长并进行症状观察。有症状的苗木单独检测。没有症状的分组检测，分组方法和检测方法同5.2。1 SN/T 2368—20096检测方法6. 1酶联免疫吸附测定见附录 B。6.2 RT-PCR 检测见附录 C。6.3实时荧光 PCR 检测见附录 D。6.4生物学测定见附录 E。结果判定酶联免疫吸附测定为阳性，RT-PCR检测或实时荧光 PCR.检测或生物学测定亦为阳性，可判定待检样品带有番茄斑萎病毒。8样品保存8.1样品保存经检验确定携带番茄斑萎毒的样品应在合适的条件下保存，种子保存在 4℃，病株在一20℃或者一80℃冰箱中保存，做好标记和登记工作。8.2结果记录与资料保存完整的实验记录包括：样品的来源、种类、时间，实验的时间、地点、方法和结果等，并要有经手人和实验人员的签字。酶联测定需有酶联板反应的原始数据,RT-PCR检测需有电泳结果图片，实时荧光PCR需有反应原始数据,生物学测定需有鉴别寄主的症状照片。 SN/T 2368--2009附录A(资料性附录)番茄斑萎病毒相关资料A.1 寄主范围TSWV寄主范围非常广泛,Peters(1998)所列的寄主名单包括90个科双子叶植物和8个科单子叶植物的940余种植物。菊科213种和茄科168种豆科50余种易感染TSWV。A.2 病害症状TSWV可引起多种症状，即使在同一种寄主植物上，也会因品种、年龄、营养状况和环境条件的不同有很大差异。病害症状见表 A病害症状,表A叶子呈青铜色卷曲、出现坏死条纹和斑点，叶柄、茎和茎尖产生深褐色条纹。与健康植株相比，被害番茄植株矮小。红色或黄色的番茄成熟时表皮出现暗红色或黄色块斑。坏死严重时，导致植株死亡。整株矮化和黄化，叶片呈现褪绿线纹或花叶，并伴有坏死斑。茎上有坏死条纹延伸至顶芽。成熟果辣椒实上，可见带有同心环或坏死条纹的黄斑。植株受害后，从一侧叶片开始出现褪绿,并产生褐色斑纹。接着变色延伸至新叶，之后这一侧停止生莴苣长，呈现典型扭曲症。受侵染叶片表现黄色或褐色斑或叶片变为栎叶状。大岩桐有些品种出现矮化基变黑或叶片出现褐色叶斑。凤仙花花生芽坏死、叶褪绿、萎缩和植株死亡。菊花