NYT 468-2006动物组织中盐酸克伦特罗的测定 气相色谱/质谱法.pdf

ICS 67.050X 04NY中华人民共和国农业行业标准NY/T 468—2006代替 NY/T 4682001动物组织中盐酸克伦特罗的测定气相色谱／质谱法Determination of residual clenbuterol in animal tissuesgas chromatography/mass spectrometry2006-04-01实施2006-01-26 发布中华人民共和国农业部发布 NY/T 468--2006前言本标准由中华人民共和国农业部提出并归口。本标准起草单位：农业部畜禽产品质量监督检验测试中心。本标准主要起草人：吴银良、刘素英、单吉浩、李艳华、王海、李卫东、薛毅、尤华、侯东军、刘勇军、蔡英华、杨红菊。1 NY/T 468—2006动物组织中盐酸克伦特罗的测定气相色谱/质谱法1 范围本标准规定了以气相色谱/质谱(GC/MS)法测定动物组织中盐酸克伦特罗残留的方法。本标准适用于动物肝组织中盐酸克伦特罗的测定。方法的检出限为2.0ug/kg。2原理对样品在碱化的条件下用乙酸乙提取，合并提取液后，利用盐酸克伦特罗易溶于酸性溶液的特点，用稀盐酸反萃取,萃取的样液pH调至 5.2后用 SCX固相萃取小柱净化,分离的药物残留经过双三甲基硅烷三氟乙酰胺(BSTFA)衍生后用带有质量选择检测器的气相色谱仪测定。3试剂和材料3.130 mmol/L盐酸:用蒸馏水稀释 30mL 1 mol/L盐酸溶液至 1 L即成。3.2甲醇：分析纯。3.34%氨化甲醇：用甲醇稀释4mL氨水溶液（比重0.88g/mL)至100mLs3.4乙酸乙酯：分析纯。3.510%碳酸钠溶液：称取10g无水碳酸钠溶解于90mL蒸馏水中即成。3.6双三甲基硅烷三氟乙酰胺,BSTFA。3.7甲苯：分析纯。3.8 SCX 小柱:supclclean,LC-SCX Sep Pak 小柱 500 mg,3 mL。3.9盐酸克伦特罗标准溶液。3.9.1储备液：精确称取适量的盐酸克伦特罗标准品，用甲醇配成浓度约1mg/mL的标准储备液,储于冰箱中。有效期3个月。3.9.2工作液：将储备液用甲醇稀释成浓度为10ug/L～2000ug/L的克伦特罗标准溶液,存放在冰箱中备用。4仪器及设备4.1聚四氟乙烯离心管,50mL,具塞。4.2具聚四氟乙烯拧盖的试管。4.3匀质器。4.4机械真空泵。4.5旋涡混合器。4.6恒温箱，精度为±3℃。4.7 离心机。4.8气相色谱/质谱联用仪(GC/MS联用仪）。5 分析步骤5.1 提取1 NY/T 468--2006称取(5±0.05)g动物肝组织样品于带盖的聚四氟乙烯离心管中，加人15mL乙酸乙酯，再加人3mL10.0%碳酸钠溶液，然后以10000r/min以上的速度匀质60s，盖上盖子以5000r/min的速度离心2min,吸取上层有机溶剂于离心管中,在残渣中再加人10mL乙酸乙酯在旋涡混合器上混合1min，离心后吸取有机溶剂并合并提取液。在收集的有机溶剂中加人5mL0.10mol/L的盐酸溶液，旋涡混合30 s,以5000 r/min 的速度离心2min,吸取下层溶液，同样步骤重复萃取一次,合并两次萃取液，用2.5mol/L氢氧化钠溶液调节pH至5.2。5.2净化SCX小柱依次用5mL甲醇、5mL水和5mL30 mmol/L盐酸活化,然后将 5.1中萃取液上样至固相萃取小柱中,依次用 5mL水和 5mL.甲醇淋洗柱子,在溶剂流过固相萃取柱后,抽干 SCX小柱,再用5mL4%氨化甲醇溶液洗脱，收集洗脱液。5.3测定5.3.1衍生化在50℃水浴中用氮气吹干上述洗脱液，加人100μL甲苯和100μLBSTFA,试管加盖后于旋涡混合器上震荡30s,在80℃的烘箱中加热衍生1h(盖住盖子）,同时吸取0.5mL标准工作液加人到4.5mL4%氨化甲醇溶液中,用氮气吹干后同样品操作，待衍生结束冷却后加人0.3mL甲苯转人进样小瓶中，进行气相色谱/质谱分析。5.3.2GC/MS 测定参数设定色谱柱:HP-5MS5%苯基甲基聚硅氧烷,30m×0.25mm（内径）,0.25μm(膜厚);进样口：220℃；进样方式不分流；进样体积：1μ;柱温：70℃（保持0.6min），以25℃/min升温至200℃（保持6min），以25℃/min升温至280℃（保持 5 min);载气：氨气；流速:0.9mL/min(恒流);GC/MS传输线温度：280℃；溶剂延迟：8min;EM电压:高于调谐电压200V;离子源(EI)温度：200℃；四极杆温度：160℃；选择离子监测:(m/z)86,212,262,277。5.4定性定量方法5.4.1定性样品峰与标样的保留时间之差不多于2s，并人工比较选择离子的丰度，其中试样峰的选择离子相对强度（与基峰的比例）不