SN_T 2801-2011传染性念珠菌病检疫技术规范.pdf

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 2801—2011传染性念珠菌病检疫技术规范Quarantine protocol for contagious candidiasis2011-07-01实施2011-02-25 发布中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局数码防在 SN/T 2801—2011前本标准按照GB/T 1.1一2009给出的规则起草。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国沈阳出人境检验检疫局、中华人民共和国山西出入境检验检疫局和中华人民共和国吉林出人境检验检疫局。本标准主要起草人：林颖、廉慧锋、刘金华、耿庆华、王金玲、王芳、贾琳、巩红霞、张敏爱。 SN/T 2801—2011传染性念珠菌病检疫技术规范范围1本标准规定了传染性念珠菌分离培养、镜检及鉴定方法。本标准适用于传染性念珠菌病的检疫和诊断。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法3试剂及设备3.1 试剂生理盐水，实验用水应符合GB/T6682的要求，配制见A.3.1.13. 1. 210%氢氧化钾溶液，配制见A：2。革兰氏(Grams)染液，配制见 A.i3。3.1.31葡萄糖-酵母汁-蛋白陈液体培养基，配制见 A.3. 1. 4沙堡氏琼脂培养基（SDA），配制见A/5。3. 1.5动物(兔、豚鼠、鸡、牛羊等均可)血清。3.1.61%玉米粉吐温-80琼脂平板，配制觅A.6。3. 1.7科玛嘉显色培养基(CHROMagarrTM Candida 显色培养基）13.1.8API Candida 假丝酵母鉴定系统²。3. 1.93.2设备3.2. 1电热鼓风干燥箱。3.2.2高压灭菌锅。生化培养箱：25.0℃±1℃,36.0℃±1℃。3.2.3低温高速离心机（转速3000r/min以上）。3.2.43. 2.5生物显微镜。1）CHROMagarTM Candida显色培养基是由 CHROMagar公司提供的产品商品名，给出这一信息是为了方便本部分的使用者。如果其他等效产品具有相同或更佳效果，则可使用那些等效产品。但应注意：在CHROMagarTCandida显色培养基上，白色念珠菌呈绿色。检测时，应注意可疑菌落的挑选，以避免漏检。2）API Candida 假丝酵母鉴定条是由生物梅里埃公司提供的产品商品名，给出这一信息是为了方便本部分的使用者。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用那些等效产品。1 SN/T 2801—20114　诊断方法4.1涂片镜检法4.1.1样品采集采集口腔、咽喉、食道和嗪囊发生的白色假膜和溃疡物，血、尿、粪便及脏器组织。血、尿等液体样品需经3000r/min离心30min后取沉淀物作涂片外，其他样品均可用生理盐水或10%氢氧化钾涂片后直接镜检或革兰氏染色后镜检。4.1.2生理盐水或10%氢氧化钾涂片镜检在载玻片上加1滴生理盐水或10%氢氧化钾溶液，将待检样品与生理盐水或10%氢氧化钾溶液混合作涂片，加盖玻片后置显微镜下观察。在涂片中可见到孢子呈卵圆形成群或成链状排列，大小约为2 μm×6 μm,有时见假菌丝。4.1.3革兰氏(Grams)染色涂片经火焰固定后，滴加草酸胺结晶紫液数滴，染色1min，水洗。滴加革兰氏碘液媒染1min，水洗。滴加95%酒精脱色，不断轻摇玻片，3 s～5s后，斜持玻片，使酒精流去，再滴95%酒精，如此反复2次～3次至无紫色脱落为止。水洗滴加复红染液1min，水洗、干燥、镜检。在涂片中可见到革兰氏阳性的芽生孢子及菌丝或假菌丝。4.2分离培养镜检4.2.1葡萄糖-酵母汁-蛋白陈液体培养基培养样品接种葡萄糖-酵母汁-蛋白陈液体培养基后，经25℃ 3d培养，培养基表面无薄膜，多在管底生长。镜下可见孢子呈球形或短卵圆形,大小为(3.5μm～6 μm)×（6 μm～1l μm)。4.2.2沙堡罗氏琼脂培养基(SDA)培养样品接种沙堡罗氏琼脂培养基，37℃或室温均可生长。培养24 h～48 h后，可形成白色乳脂状高度隆凸的菌落，光滑、柔软而闪亮，菌落具有酿酒味，老龄培养物可形成带隔膜的菌丝、球形带厚膜的肿胀细胞。4.3鉴定试验4.3.1芽管形成试验玻片法：首先在载玻片上滴加1滴血清，然后接种少量真菌，覆以灭菌盖玻片，置湿润的平皿内，置37℃温箱培养，每隔1 h检查1次，共检查3次。试管法：取无菌小试管一支，加入0.2mL动物血清，接种少量真菌，充分振荡混合数分钟后，置37℃生化培养箱培养，之后每隔1h用铂金耳取出1滴含菌血清，放载玻片上覆以盖玻片，镜检，共检3次。白色念珠菌可由孢子长出短小的芽管。4