NYT 1665-2008畜禽饮用水中总大肠菌群和大肠埃希氏菌的测定 酶底物法.pdf

ICS 67.100.01C 53NY中华人民共和国农业行业标NY/T 1665--2008畜禽饮用水中总大肠菌群和大肠酶底物法埃希氏菌的测定Determination of total coliforms and escherichia coli in drinking waterfor livestock and poultry-Enzyme substrate method2008-08-10实施2008-07-14 发布中华人民共和国农业部发布 NY/T 1665—2008前言本标中附录 A 为规范性附录。本标准由中华人民共和国农业部畜牧业司提出。本标准由全国畜牧业标准化技术委员会归口。本标准起草单位：农业部食品质量监督检验测试中心（上海）。本标准主要起草人：孟瑾、郑冠树、张敏、吴榕、韩奕奕、樊蕴秀、蒋曙光I. NY/T 1665—2008畜禽饮用水中总大肠菌群和大肠埃希氏菌的测定‧酶底物法1范围本标准规定了畜禽饮用水中总大肠菌群和大肠埃希氏菌的酶底物法测定方法。本标准适用于畜禽饮用水中总大肠菌群和大肠埃希氏菌的最可能数(MPN)值的快速测定。本方法可同时检测畜禽饮用水中的总大肠菌群和大肠埃希氏菌。2 规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法3原理在选择性培养基上总大肠菌群产生的特异性生物酶β-半乳糖苷酶(β~D-galactosidase),将无色的底物水解为黄色的邻硝基酚(ONP），依此测定畜禽饮用水中总大肠菌群最可能数(MPN)值。在选择性培养基上大肠埃希氏菌产生的特异性生物酶β-半乳糖苷酶(β-D-galactosidase），使无色的培养基呈现黄色，同时产生的 β-葡萄糖醛酸酶(β-glucuronidase)分解 4-甲基伞形酮-β-D-葡萄糖醛酸苷（MUG），使4-甲基伞形酮游离并产生荧光物质，在波长366 nm紫外光下产生特征性蓝色荧光，依此测定畜禽饮用水中大肠埃希氏菌最可能数(MPN)值。4培养基及试剂除非另有说明,在分析中仅使用确认为分析纯的试剂；实验用水应符合GB/T 6682中三级水的规定。4.1 培养基Minimal Medium ONPG- MUG(MMO-MUG)培养基,称取以下试剂:5.0 g硫酸铵［（NH4）2SO4硫酸锰（MnSO4）0.5 mg硫酸锌(ZnSO4）0. 5 mg硫酸镁（MgSO4）100. 0 mg10.0 g氯化钠(NaCI)氯化钙(CaCl2)50. 0 mg亚硫酸钠(Na2SO3)40.0 mg1. 0 mg两性霉素 B(amphotericin B)邻硝基苯-β-D-吡喃半乳糖苷(ONPG)500. 0 mg①可选用Colilert 或同类市售商品。1 NY/T 1665—200875.0 mg4-甲基伞形酮-β-D-葡萄糖醛酸苷(MUG)500. 0 mg茄属植物萃取物（solanum萃取物）5.3gN-2-羟乙基哌嗪N-2-乙磺酸钠盐(HEPES钠盐)6.9gN-2-羟乙基哌嗪-N-2-乙磺酸(HEPES)培养基经过121℃、5min 灭菌后,适用于 1000 mL水样的测定。4.2灭菌生理盐水称取 8.5g氯化钠(NaCl)，用适量蒸馏水溶解稀释至1000mL,混匀后取 90mL分装到稀释瓶内，121℃、20min高压灭菌。5仪器和设备5.1培养箱:36℃±1℃。5.2高压蒸汽灭菌锅。5.3烘箱。5.4定量盘：定量培养用无菌塑料盘，含51个孔穴，每一孔穴可容纳2mL水样。5.5程控定量封口机。5.6紫外灯：波长366 nm。5.7 天平:感量0.01g。6 检验步骤6.1试样制备检测所需水样为 100mL。必要时,可对水样进行 10倍稀释,取 10mL水样,加人到 90mL灭菌生理盐水(4.2)中,混匀。6.2定性反应量取 100mL士0.5mL水样(6.1)于 100mL无菌稀释瓶中,加入2.7g±0.5g MMO-MUG培养基粉末（4.1)，混和均匀，放人36℃士1℃的培养箱(5.1)内培养24h。6.351孔定量盘法6.3.1量取 100 mL士0.5mL水样(6.1)于100mL无菌稀释瓶中,加人2.7g士0.5g MMO-MUG培养基粉末（4.1），混摇均匀，使之完全溶解。6.3.2将水样(6.3.1)全部分装在定量盘(5.4)51个孔穴内，抚平定量盘背面以除去孔穴内气泡，用程控定量封口机(5.5)封口，放入36℃士1℃的培养箱(5.1)内培养24h。7结果报告7.1结果判