NY_T 3139-2017饲料中左旋咪唑的测定 高效液相色谱法.pdf

ICS 65.120B 46NY中华人民共和国农业行业标准NY/T 3139—2017饲料中左旋咪唑的测定高效液相色谱法Determination of levamisole in feeds-High performance liquid chromatography2017-12-22 发布2018-06-01实施中华人民共和国农业部发布: NY/T3139—2017前言本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草本标准由农业部畜牧业司提出。本标准由全国饲料工业标准化技术委员会（SAC/TC76)归口。本标准起草单位：农业部饲料质量监督检验测试中心（广州）。本标准主要起草人：林海丹、吴荔琴、廖雁平、江庆娣、陈运勤、伍宏凯、邓国东1 NY/T3139—2017饲料中左旋咪唑的测定高效液相色谱法1范围本标准规定了饲料中左旋咪唑含量测定的高效液相色谱法。本标准适用于配合饲料、浓缩饲料、精料补充料及添加剂预混合饲料中左旋咪唑的测定，本标准中左旋咪唑在配合饲料中的检出限为0.2mg/kg，定量限为0.5mg/kg；在浓缩饲料、精料补充料、添加剂预混合饲料中的检出限为0.4mg/kg，定量限为1.0mg/kg。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T14699.1饲料采样GB/T20195动物饲料试样的制备3原理饲料中左旋咪唑在碱性环境下，用乙酸乙酯提取，取部分提取液氮气吹干，流动相定容，正已烷净化，高效液相色谱仪测定，外标法定量。4试剂与材料除非另有说明，所用试剂均为分析纯，实验用水符合GB/T6682中一级水的规定。4.1盐酸左旋咪唑对照品：纯度≥98.5%。4.2乙腈：色谱纯。4.3甲醇：色谱纯。4.4乙酸乙酯。4.5正已烷。4.65mol/L氢氧化钠溶液：称取氢氧化钠40g，用水溶解并稀释至200ml，混匀即得。4.70.02mol/L磷酸二氢钠溶液：称取无水磷酸二氢钠2.40g，用水溶解并稀释至1000ml，混勺即得。4.8流动相：0.02mol/L磷酸二氢钠溶液十乙腈=75十25（V+V）。4.9左旋咪唑标准储备溶液：准确称取盐酸左旋咪唑对照品（4.1)11.78mg（相当于左旋咪唑10mg精确至0.01mg），置于10mL容量瓶中，用甲醇（4.3)溶解并定容至刻度，配制成1mg/mL标准储备溶液。该储备溶液于2℃～8℃保存，保存期6个月。4.10左旋咪唑标准工作溶液：准确量取左旋咪唑标准储备溶液（4.9）1mL，置于10ml容量瓶中，用甲醇（4.3)溶解并定容至刻度，配制成0.1mg/ml.标准工作溶液。该工作溶液于2℃～8℃保存，保存期3个月。4.11pH试纸：范围9~14。5仪器设备5.1高效液相色谱仪：配二极管阵列检测器。1 NY/T3139—20175.2分析天平：感量0.001g；感量0.01mg。5.3天平：感量0.01g。5.4氮吹仪。5.5超声波清洗器。5.6振荡器。5.7涡旋混合器。5.8高速离心机：转速为12000r/min及以上。5.9微孔滤膜：0.45μm，有机相。6采样和试样的制备按照GB/T14699.1的规定抽取有代表性的样品，四分法缩减取样。按照GB/T20195的规定制备试样，粉碎后过0.45mm孔径筛，充分混匀，装人密闭容器中备用。7分析步骤7.1样品提取称取配合饲料2g（浓缩饲料、精料补充料、添加剂预混合饲料1g，精确到0.001g)样品于50ml离心管中，加水10ml，用5mol/L氢氧化钠溶液（4.6）调pH至12～13。涡旋混匀1min，超声20min，准确加人乙酸乙酯（4.4)20.0ml，振荡30min，以6500r/min离心5min。准确移取上清液5.0ml于试管中，置于50℃氮气吹干。准确加人流动相（4.8）2.00ml超声溶解，加人正已烷（4.5）2ml，涡旋1min，静置分层。取下层液，高速离心12000r/min离心10min，过滤膜（5.9）作为试样溶液，上机测定。7.2标准曲线制备准确量取左旋咪唑标准工作溶液（4.10)适量，用流动相（4.8)逐级稀释配制成浓度为0.05ug/ml、0.10μg/ml、0.20μg/ml.、0.50μg/ml、1.00μg/ml、5.00μg/mL和10.0μg/ml的系列标准溶液，供高效液相色谱分析。以色谱峰面积为纵坐标、对应的标准溶液浓度为横坐标，绘制标准曲线，求回归方程。8测定8.1液相色谱参考条件色谱柱：SCX柱（强阳离子交换柱），柱长250mm，内径4.6mm，粒径5um；或性能相当者；流动相：0.02mol/L磷酸二氢钠溶液十乙