NY_T 3346-2019马铃薯抗青枯病鉴定技术规程.pdf

ICS 65.020.01B 04NY中华人民共和国农业行业标准NY/T 3346—2019马铃薯抗青枯病鉴定技术规程Technical code of practice for evaluation of potato resistance to bacterial wilt2019-09-01实施2019-01-17 发布夕中华人民共和国农业农村部发布n NY/T 3346—2019前言本标推按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。本标准由农业农村部种植业管理司提出并归口。本标准起草单位：中国农业科学院蔬菜花卉研究所。本标准主要起草人：杨宇红、谢丙炎、振川、凌键、李彦I NY/T 3346—2019马铃薯抗青枯病鉴定技术规程1范围本标准规定了马铃薯抗青枯病(bacterialwilt)鉴定方法与评价标准。本标准适用于马铃薯（SolanumtuberosumL.）品种和材料对青枯病抗性的室内鉴定及评价。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件.仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件.其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。NY/T1858.4番茄抗青枯病鉴定技术规程SN/T1135.9马铃薯青枯病菌检疫鉴定方法3术语和定义NY/T1858.4界定的以及下列术语和定义适用于本文件。3.1马铃薯青枯病Potato.bacterialwilt由茄科劳尔氏菌［Ralstoniasolanacearum（Smith）Yabuuchictal.丁侵染马铃薯植株弓起的一种全株性萎蕉的细菌性维管束病害。病害症状及病原菌生物学性状参见附录A。3. 2生理小种physiologicalrace病原物种内在形态上无差异，但在不同种植物和品种上具有显著致病性差异的类群。4试剂与材料除非另有说明.本方法所用试剂均为分析纯或生化试剂。4.1TTC(2,3,5-氯化三苯基四氮唑)母液称取1gTTC溶于100mL蒸馏水中，完全溶解后，用细菌过滤器过滤灭菌，保存于4℃的棕色试剂瓶中备用。4.2培养基培养基包括青枯菌培养基和马铃薯组培苗培养基。各种培养基的配方及配制方法见附录B。4.3对照材料以马铃薯‘米拉或‘合作-88等感病品种为感病对照。4.4育苗基质直接购买商品化蔬菜育苗基质。亦可将草炭、蛭石和菜田土按体积2：1：1的比例混合均匀，于(134士1)℃湿热灭菌1h。4.5其他用品培养皿、离心管、枪头、冻存管、手术刀、剪刀、移植环、烧杯、量筒、试剂瓶、锥形瓶、酒精灯、组培苗培养盒、育苗钵等。5仪器设备和设施恒温光照培养箱、高压灭菌锅、移液器、电子天平、超净工作台、冰箱、人工接种鉴定室等。1 NY/T 3346—20196材料育苗育苗包括试管苗培养和盆栽育苗，见附录C。7接种体制备7.1青枯病菌分离、纯化按照SN/T1135.9的规定进行青枯病菌的分离、纯化、鉴定和保存。7.2接种体繁殖、制备选择马铃薯青枯菌的优势小种生理小种3号作为接种病原菌，小种鉴定方法参见附录D。用接种环蘸取菌液在TTC培养基平板上划线，在28℃恒温培养箱中培养48h后，挑取边缘乳白色、中间部位淡红色、流动性好的毒性单菌落，移入青枯菌液体培养基中，28℃200r/min振荡培养16h～18h，加适量无菌水配成接种的病菌悬浮液。8鉴定方法8.1试管苗接种鉴定8.1.1接种时期在组培苗培养基中培养3周的试管苗。8.1.2接种浓度约 1X×108CFU/ mL(OD600 =0. 1)。8.1.3接种方法采用伤根接种法。选用生长一致的马铃薯试管苗3盒，试管苗繁殖见C.1.3，使用手术刀片于无菌环境下围绕植株根部在培养基划“#”伤根，随后每盒试管苗注人接种菌液5mL。每份材料设3个重复，每重复不少于10株苗。8.1.4接种后管理接种后置于（28士1)℃的光照培养箱内，在每日光照16h、黑暗8h条件下培养。8.1.5病情调查调查方法从接种后第6d开始，每隔2d观察鉴定材料的发病情况，待感病对照达到相应病级后，调查每份鉴定材料接种株发病情况，根据表1中的病害症状描述，逐份材料逐株进行调查，记载接种株病情级别，按式（1)计算病情指数（diseaseindex，DI）。(s×n)DI =X 100:(1)NXS式中:DI 病情指数；И—名各病情级别数值与相对应的各病情级别植株数乘积的总和；各病情级别数值；Sn各病情级别的病株数，单位为株；N-调查的总株数，单位为株；S-病情级别的最高数值。病情级别划分试管苗植株病情分级及其对应的症状描述见表1。2 NY/T3346—2019表1马铃薯抗青枯病接种鉴定的病情级别划分症状描述病情级别0无发病症状11%~25%的叶片萎226%~50%的叶片萎热351%～75%的叶片娄為475%以上叶片娄或植株死亡8.2温室