SCT 7203.1-2007对虾肝胰腺细小病毒病诊断规程 第1部分：PCR检测法.pdf

ICS 65.020.30B 41Sc中华人民共和国水产行业标准SC/T 7203.1-2007对虾肝胰腺细小病毒病诊断规程第 1部分：PCR检测法Diagnostic Protocols for Hepatopancreatic Parvovirus Diseaseof Penaeid Shrimp--Part 1 : PCR Method2007-09-01 实施2007-06-14 发布中华人民共和国农业部发布 SC/T 7203. 1--2007前言SC/T 7203《对虾肝胰腺细小病毒病诊断规程》分为三个部分:-第1部分:PCR检测法；第2部分:组织病理学诊断法；-第3部分：新鲜组织的T-E染色法。本部分为 SC/T 7203的第1部分。本部分的附录 A为资料性附录。本部分由中华人民共和国农业部渔业局提出。本部分由全国水产标准化技术委员会归口。本部分起草单位：中国水产科学研究院黄海水产研究所、全国水产技术推广总站。本部分主要起草人：黄健、杨冰、陈爱平、宋晓玲、史成银、杨丛海、魏琦。 SC/T 7203. 1--2007对虾肝胰腺细小病毒病诊断规程第 1部分：PCR检测法1警告一使用本标准的人员应有正规实验室工作的实践经验，本标准并未指出所有可能的安全问题。使用者有责任采取适当的安全和健康措施，并保证符合国家有关法规规定的条件。2 范围SC/T 7203 的本部分规定了对虾肝胰腺细小病毒病 PCR检测法的原理、试剂与材料、仪器设备、操作步骤和结果判定。本部分适用于对虾活体、冰鲜虾产品及其粪便和敏感宿主等样品中肝胰腺细小病毒（hepatopancre-atic Parvovirus,HPV)带毒情况的定性检测。不适于对病毒量或感染活性的估测以及宿主感染程度的评估。3规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件,其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件,其最新版本适用于本标准。SC/T 7202.2-2007 斑节对虾杆状病毒病诊断规程 第 2 部分:PCR 检测法SC/T 7203.2--2007 对虾肝胰腺细小病毒病诊断规程 第 2 部分:组织病理学诊断法4　原理4.1对虾肝胰腺细小病毒病的病原和病理学特征见 SC/T 7203.2一2007（对虾肝胰腺细小病毒病诊断规程第 2 部分:组织病理学诊断法)中 3.1的规定。4.2技术原理按照 SC/T 7202.2—2007(斑节对虾杆状病毒病诊断规程第2部分:PCR检测法)中 4.2的规定。5试剂和材料5.1 所需试剂除引物、阳性对照和阴性对照以外按照SC/T 7202.2-2007（斑节对虾杆状病毒病诊断规程第2部分:PCR检测法)中第5章的规定。5.2 10 μmol/L 引物 F1:5-GGT- GAT- GTG-GAG-GAG- AGA-3,-20℃保存。5.3 10 μmol/L 引物 R1:5-GTA- ACT- ATC-GCC-GCC- AAC~3,20℃保存。5.4　阳性对照为已知 HPV 阳性的组织或粪便样品的 DNA 模板，－20℃保存。5.5阴性对照为已知 HPV 阴性的组织或粪便样品的DNA模板，－20℃保存。6仪器和设备所需仪器设备按照 SC/T 7202.2—2007（斑节对虾杆状病毒病诊断规程第2部分:PCR检测法）中第6章的规定。1 SC/T 7203.1—20077 操作步骤7.1反应体系的准备7.1.1 PCR 反应可选择 25μL、50μL 或 100 μL反应体系进行。7.1.2在PCR前区按表1的要求,加入除Taq酶以外的各项试剂,配制成无酶反应预混物。按10份/支或100份/支分装,保存于一20℃。在临用前,根据所需的反应份数,取出无酶反应预混物,加人相应体积的Tag酶,混匀，即成完全的反应预混物。按1份/支分装到0.2mLPCR管中。如果 PCR仪不具备热盖功能，再向各管内加人50μL液体石蜡。暂存于4℃。表 1100份PCR反应预混物所需试剂组成试剂终浓度100 μL 体系50 μL体系剂25 μL体系试1 000 μL1x500 μL250 μL10×PCR缓冲液(无 Mg+)1 600 μL800 μL4.0 mmol/L400 μLMgCl2(25 mmol/L)200 μL 200 μmol/ L100 μL50 μLdNTP(10 mmol / L)1 000 μL500 μL1 μmol / L250 μL10 μmol/L引物 F11 000 μL1 μmol/ L500 μL10 μmol/L引物 R1250 μL4 700 μL2 350 μL1175