NY_T 2795-2015苹果中主要酚类物质的测定 高效液相色谱法.pdf

ICS 67.080B 31NY中华人民共和国农业行业标准NY/T2795—2015苹果中主要酚类物质的测定高效液相色谱法Determination of major phenolic compounds in apple-High performance liquid chromatography2015-05-21发布2015-08-01实施中华人民共和国农业部发布 NY/T 2795—2015前言本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草本标准由农业部加工局提出并归口。本标准起草单位：中国农业科学院农产品加工研究所、中国农业科学院果树研究所。本标准主要起草人：刘璇、毕金峰、陈芹芹、吴昕烨、邓健康、聂继云、易建勇、周林燕、郑金铠、周沫、李静。1 NY/T2795—2015苹果中主要酚类物质的测定高效液相色谱法1范围本标准规定了苹果中主要酚类物质的高效液相色谱测定方法。本标准适用于苹果中没食子酸、原儿茶酸、新绿原酸、原花青素B1、儿茶素、绿原酸、原花青素B2、咖啡酸、表儿茶素、P-香豆酸、芦丁、阿魏酸、皮苷、根皮苷、榭皮素和根皮素等单个或多个组分含量的测定。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3原理苹果中的主要酚类物质经乙醇溶液提取，C18固相萃取柱净化、定容，微孔滤膜过滤，高效液相色谱法测定，外标法定量。4试剂和材料除非另有说明，本标准所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。4.1试剂4.1.1乙醇(CH:CH2OH,CAS号：64-7-5)。4.1.2乙(CHCN,CAS号：75-05-8)，色谱纯。4.1.3甲醇(CHOH,CAS号：67-56-1），色谱纯。4.1.4甲酸（HCOOH,CAS号：64-18-6），色谱纯。4.2试剂配制4.2.1乙醇溶液（8+2)：取80mL乙醇（4.1.1)加人20mL水中，混匀。4.2.2甲酸溶液（2%，体积分数）：取2mL甲酸（4.1.4），用水稀释至100mL。4.2.3甲酸一乙腈溶液（95+5）：取95mL甲酸溶液（4.2.2），加人5mL乙腈中，混匀。4.3标准品4.3.1没食子酸(C,H.Os），纯度≥98%。4.3.2原儿茶酸(C,HO4），纯度≥99%。4.3.3新绿原酸(CsH1sO。），纯度≥98%。4.3.4原花青素B1（C3oH26O12），纯度≥95%。4.3.5儿茶素（C15H1O），纯度≥98%。4.3.6绿原酸(C1sH1sO。）,纯度≥95%。4.3.7原花青素B2（CsoH26O12），纯度≥98%。1 NY/T2795—20154.3.8咖啡酸（CHsO4），纯度≥95%。4.3.9表儿茶素（C15H14O），纯度≥98%。4.3.10P-香豆酸（CgH:O:），纯度≥98%。4.3.11芦丁（C27H3oO16），纯度≥98%。4.3.12阿魏酸（C1oH1oO4），纯度≥99%。4.3.13皮苷（C21H20O1），纯度≥98%。4.3.14根皮苷（C21H28O12），纯度≥98%。4.3.15皮素（C15H14O。），纯度≥98%4.3.16根皮素（C15H14Os），纯度≥99%PUBLISA4.4标准溶液配制MENRD店4.4.12mg/mL单4.3）10mg（精确到一西类物品配制成SO量浓度为2mg/mL的0.0001g)，于5mL棕C单一酚类物质标准储AANSESEARET OENIEmg/m标准示准储备溶液别m5类物质混合甲醇浓度（4.4.1)于2mL栋标准中间溶液。准工作、0.1mL、4.4.3酚类物容液C4m3）定成质量浓0.2mL、0.4ml棕LR示准工作溶度为1mg/L、5nii4.5材料4.5.1Cis固相4.5.2滤膜：0.本c5仪器5.1液相色谱仪：酉5.2分析天平：感量A5. 3研磨仪。5.4离心机：转速可达到r/min5.5漩涡混合器。5. 6旋转蒸发器。5.7超声波萃取仪：工作频率40kHz，功率5.8固相萃取器。5.9圆底烧瓶：100mL。5. 10聚四氟乙烯离心管：50mL。6试样制备与保存将苹果样品，用干净纱布轻轻将样品表面擦净，按取样要求取200g样品采用对角线分割法，取对角部分，将其切碎，充分混均，再用四分法取样，用液氮冷冻后，于研磨仪中研磨成粉末，装人聚乙烯塑料瓶，一20℃以下保存，备用。2 NY/T2795—20157分析步骤7.1提取称取试样5g（精确到0.01g）于50mL聚四氟乙烯离心管中，加人20mL乙醇溶液（4.2.1），用漩涡混合器充分混合，室温下超声提取15min，以10000r/mi