SN 1627-2005进出口动物源食品中硝基呋喃类代谢物残留量测定方法 高效液相色谱串联质谱法.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 1627--2005进出口动物源食品中硝基呋喃类代谢物残留量测定方法高效液相色谱串联质谱法Determination of metabolites of nitrofurans residues in animal origin foodfor import and export--HPLC-MS/MS2006-02-01实施2005-08-18 发布中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局 SN/T 1627--2005前言本标准附录 A 和附录 B为资料性附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国河北出入境检验检疫局。本标准主要起草人：王凤池、马振栋、郭春海、陈瑞春、窦彩云。本标准系首次发布的出人境检验检疫行业标准。1 SN/T 1627—2005进出口动物源食品中硝基呋喃类代谢物残留量测定方法高效液相色谱串联质谱法1范围本标准规定了动物源食品中硝基类代谢物残留量液相色谱-质谱联用测定方法。本标准适用于虾、鸡肉、蜂蜜、肠衣中硝基呋喃类代谢物残留量的测定。2 测定方法2.1方法提要样品中与蛋白质结合的硝基呋喃类代谢物(参见附录A)在酸性环境下水解游离出来，用邻硝基苯甲醛衍生后，以乙酸乙酯提取。经过净化浓缩，用液相色谱质谱联用仪测定。外标法定量。2.2试剂和材料除另有规定外，所用试剂均为分析纯，水为超纯水。2. 2. 1乙腈:HPLC级。甲醇:HPLC级。.3乙酸乙酯:HPLC级。2.2.4邻硝基苯甲醛。2. 2. 5二甲亚砜。无水硫酸钠：650℃灼烧4h，冷却后贮于密闭容器中备用。2.2.6盐酸溶液:0.125 mol/L。2. 氢氧化钠溶液:1 mol/L。2.2.9氢氧化钠溶液：0.1 mol/L。氯化钠溶液：300g/1。2. 2. 102. 2. 11盐酸溶液:1 mol/L。衍生化试剂:称取 100 mg 邻硝基苯甲醛溶于 12.5 mL 二甲亚矾中,现用现配。2.2. 122.2.13定容液：0.1%乙酸水溶液：乙甲醇3：3：2(体积分数）。2.2.14 硝基呋喃类代谢物标准品：AOZ、AMOZ、AHD·HCI、SEM·HC1,纯度≥99.0%。5标准储备液：分别称取硝基呋喃类代谢物标准品 AOZ、AMOZ 10.0 mg，AHD·HCI2. 2. 1513.2 mg,SEM·HCl 14.9 mg(准确至 0. 1 mg),分别用甲醇溶解并转移至 20 mL 容量瓶中,用甲醇定容至刻度，该溶液浓度为 0.5 mg/mL,4℃以下保存。2. 2. 16标准中间液:分别吸取四种硝基呋喃类代谢物的标准储备液各 1.0 ml,用甲醇定容至 50 mL,浓度为 10 μg/mL。2.2.17标准工作液:取标准中间液 1.0 mL,甲醇稀释定容至 100 mL,浓度为 0.1 μg/mL。2. 2. 18校正曲线标准工作液:将标准工作液稀释至适宜浓度制作校正曲线，临用时配制。2.3仪器和设备2.3.1液相色谱质谱联用仪，可进行二级质谱分析。2.3. 2电子天平。2.3.3超声波清洗器。 SN/T 1627---20052.3.4恒温水浴振荡器。2.3.5pH计。2.3.6自动平衡离心机(最大转速5000 r/min）。2.3.7旋转蒸发器。2.3.8氮吹仪。2.3.9均质器。2. 3. 10漩涡混合器。2.4 测定步骤2.4. 1样品处理蜂蜜样品混勾后可直接称取。肉类和虾类先用绞肉机绞碎，混勾。盐溃肠衣样品先用剪刀剪成小于5mm宽的段，用清水洗去盐分，再用蒸馏水冲洗，在丝网器皿上摊开沥去水分5 min。2. 4. 2水解、衍生和捷取称取1g(精确至0.0lg)混匀后的样品于50mL磨口具塞离心管中,加人30mL 0.125mol/L盐酸溶液（2.2.7)和1.0mL衍生试剂（2.2.12），肉类和虾样品均质1min，蜂蜜和肠衣样品盖好塞子用力摇勾，松开塞子放气。盖好塞子后置于恒温水域振荡器上37℃振荡水解16小时（过夜）。2.4.3净化向水解溶液中加人约4.0 mL1mol/L氢氧化钠溶液（2.2.8)，用1mol/L盐酸溶液(2.2.11)和0.1mol/L氢氧化钠溶液（2.2.9），调节pH值至7.0～7.5。3000r/min离心10min，上清液倾人250mL分液漏斗中。残渣用5mL水洗涤，用玻璃棒搅匀，3000r/min离心10min，上清液并人分液漏斗中。向分液漏斗中加人 40 mL乙酸乙酯，振摇1 min，静置3 min以上。分层后将下层水相转移至另一分液漏斗中，用40mL乙酸乙酯再提取一次，弃去水相。用10 mL 300 g/L氯化钠溶液（2.2.10)依次洗涤两分液漏斗中的乙酸乙酯溶液,弃去水相。将乙酸乙层，通过