SN_T 4153-2015化学品 牛角膜混浊和通透性试验.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 4153—2015化学品牛角膜混浊和通透性试验Chemicals-Bovine corneal opacity and permeability test2015-02-09发布2015-09-01实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局 SN/T 4153—2015前 本标准等同采用联合国经济合作与发展组织(OECD)化学品测试方法437《牛角膜混浊和通透性试验》2009)。本标准与OECD化学品测试方法No.437.相比，存在以下差异：对OECD化学品测试方法No.411进行了编辑性修改；-增加了前言部分，本标准由国家质量监督检验检疫总局提出。本标准由国家认证认可监督管理委员会归口。本标准起草单位：中华人民共和国天津出人境检验检疫局。本标准主要起草人：赵琢、柳明、刘凤娟、冯杰、张彬、主娜、于燕燕。一，.rm SN/T 4153--2015牛角膜混浊和通透性试验化学品范围1本标准规定了牛角膜混浊和通透性试验(BCOP)的试验准备、试验方法和结果报告。本标准适用于化学品眼腐蚀性或严重眼损伤的鉴别试验。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T21609化学品急性眼刺激性/腐蚀性试验方法3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1角膜cornea眼球前部的透明部分，覆盖住瞳孔和虹膜，并能接收光线。3.2角膜混浊corneal opacity检测暴露于测试物后角膜的不透明度的一一种方法。角膜混浊度的增加说明其受到损伤。可按照GB/T21609中的方法对角膜混浊度进行主观评价，也可通过仪器对其进行客观评价，如浊度仪”。3.3corneal permeability角膜通透性通过测定穿过角膜细胞层的荧光素钠染料的数量对角膜内皮损伤进行定量分析。3.4体外刺激得分　in vitro irritancy score(IVIS)用BCOP实验所得出的经验公式计算，该公式通过将各处理组的平均浊度值和平均通透率整合为每一组的单独体外得分。IVIS一平均浊度值→十（15X平均通透率）。3.5浊度仪opacitometer一种通过定量分析角膜的透射光，计算出“角膜混浊度”的仪器。标准的仪器由两部分组成，每个部分都有各自的光源和光电管，一个组件用于处理过的角膜，另个用于仪器的校准和调零。卤素灯发出的光，可经对照组件（不含液体和窗口的空容器)到达光电管，也可通过实验组件（容器内含角膜)到达光电管。分析比较光电管中两种光透射性的不同，计算得出混浊度值并以数字形式显示（参见附录B）。4试验准备4.1牛眼球的来源和要求从正规屠宰场取得牛眼球。牛眼球应取自大于12月龄且小于60月龄的牛。 SN/T 4153—20154.2牛眼球的收集及实验室运送牛眼球应在供体死亡后尽快摘除，以尽量减少对眼球的机械和其他伤害。眼球置于大小适当的带有冰浴的容器中并完全没人添加抗生素（100IU/mL的青霉素和100ug/mL的链霉素）的Hanks盐溶液（HBSS)中，在运输过程中应尽可能减少生物降解及细菌污染程度。眼球收集的当天进行BCOP试验，试验中使用的所有眼球都应为当天收集的同一种群的眼球。4.3试验用牛眼球的选择标准及数量牛眼球到达实验室后，应仔细检查缺陷，包括浊度增加、划痕及新生血管形成，无以上缺陷的眼球中得到的角膜才能使用。每个处理组（测试组、阴性对照组和阳性对照组)至少包括3只眼球。5　试验方法5.1牛眼球的预处理5.1.1牛眼球的预处理将眼角膜在距虹膜边缘2mm～3mm的地方切开，为避免损坏角膜的上皮细胞和内皮细胞要小心的操作。分离的角膜安装在专门设计的角膜支架上（参见附录A），包括眼前房和眼后房，接口分别是角膜的上皮细胞和内皮细胞。两个眼房都填充预热过的伊格尔（氏）最小基础培养基（Eagle’s minimalessentialmedium,EMEM）（后眼房优先），确保无气泡形成。然后在32℃±1℃的恒温下孵育至少1h，使得角膜与介质达到平衡，并尽可能实现正常的新陈代谢。5.1.2角膜的选择标准在平衡期，两眼房都要注人新鲜预热的EMEM,平衡后测试每个角膜混浊度，即混浊度基线。任何眼角膜显示宏观组织损伤（如划痕，色素沉着，血管新生)或混浊度大于7个单位的都要丢弃。计算所有平衡角膜的平均混浊度。至少选择3个混浊度值接近所有角膜中位值的角膜，作为阴性对照角膜。将其余角膜分配为测试组和阳性对照组。5.2测试物的预处理及与角膜接触5.2.1＇液体和表面活性剂液体测试物不进行稀释。对于表面活性剂测试物，无论是固体还是液体，均应配制成质量体积比为10%的溶液，溶剂使用0.9%的氯