SN_T 2800-2011进出口蜂王浆中四环素类兽药残留量检测方法 液相色谱法-质谱/质谱法.pdf

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 2800-2011进出口蜂王浆中四环素类兽药残留量检测方法液相色谱-质谱/质谱法Determination of tetracyclines residues in royal jelly for import andexport—HPLC-MS/MS method2011-07-01实施2011-02-25发布中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局 SN/T 2800—2011言前本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国浙江出入境检验检疫局。本标准主要起草人：陈笑梅、黄超群、谢文、丰金平、刘海山。 SN/T 2800—2011进出口蜂王浆中四环素类兽药残留量检测方法液相色谱-质谱/质谱法1范围本标准规定了蜂王浆中土霍素（oxytetracycline，OTC）、四环素（tetracycline，TC）、去甲金霉素(demethylchlortetracycline,DMCTC)金霉素（chlorotetracycline,CTC)和强力霉素（doxycycline,DC)残留量的液相色谱-串联质谱测定方法。本标准适用于蜂王浆中土霉素、四环素、去甲金霉素、金霉素和强力霉素残留量的测定。2方法提要试样中的待测抗生素用EDTA-McIlvaine缓冲液提取，甲醇沉淀样品中的蛋白质，清液过HLB固相萃取柱和COOH型离子交换柱净化。液相色谱-串联质谱法测定样品中的待测物，外标法定量。3试剂和材料除另有规定外，试剂均为分析纯，水为超纯水。3.1甲醇：液相色谱级试剂。3.2乙睛：液相色谱级试剂。3.3乙酸乙酯：液相色谱级试剂。3.41草酸(C²H204·2H20)。3.5磷酸氢二钠。3. 6柠檬酸(C.H:O，·H,O)。3.7乙二胺四乙酸二钠（Na²·EDTA）。3.8氢氧化钠。3.9 0.2mol/L磷酸氢二钠溶液:称取 28.41g 磷酸氢二钠溶于适量水,再定容至1000 mL。3.100.1mol/L柠檬酸溶液：称取21.01g柠檬酸溶于适量水，再定容至1000mL。3.11McIlvaine缓冲溶液:将 625 mL 0.2 mol/L磷酸氢二钠溶液(3.9)与 1 000 mL 0.1 mol/L柠檬酸溶液(3.10)混合，用磷酸调节pH=4.0。3.12EDTA-McIlvaine 缓冲溶液:称取60.5 g 乙二胺四乙酸二钠，加人 1625 mL Mcllvaine 缓冲溶液（3.11)中，使其溶解摇匀。3.13氢氧化钠溶液:1 mol/L。3.145%（体积分数)甲醇水溶液,将5mL甲醇与 95 mL水混合摇匀。3. 15甲醇-乙酸乙酯混合液:将10mL甲醇与90mL乙酸乙酯混合摇匀。3.160.01 mol/L草酸溶液:称取1.26 g草酸溶于适量水,再定容至 1000 mL。3.17草酸-乙腈混合液（80+20，体积比）：将80mL草酸溶液（3.16)与20mL乙腈混合摇匀。3.18四环素族抗生素标准品：土霉素盐酸盐（OTC·HCI)纯度大于等于 97.9%，四环素盐酸盐(TC·HCI)纯度大于等于97.0%，去甲金霉素盐酸盐(DMCTC·HCI)纯度大于等于99.0%，金霉素盐酸盐(CTC·HCI)纯度大于等于 99.0%,强力霉素(DC)纯度大于等于 96.5%。1 SN/T 2800—20113.19标准储备液:分别称取 OTC·HCl 10.8 mg,TC·HCl 11.0 mg,DMCTC·HCl 10.8 mg,CTC·HCl10.8mg,DC 10.4 mg，用甲醇溶解并定容到100 mL容量瓶中,溶液浓度为 0.1mg/mL,一18℃保存,有效期6个月。3.20混合标准中间液:分别准确移取适量 0.1 mg/mL OTC、TC、DMCTC、CTC、DC 储备液（3.19），用甲醇稀释定容为20 ng/mL,0 ℃～4℃保存,有效期1个月。3.21混合标准工作溶液：根据需要，将中间液(3.20)用阴性样品处理液稀释至适当浓度的工作溶液。3.22HLB固相萃取柱:500 mg,6 mL。使用前分别用5mL甲醇和 10 mL 水预洗并保持柱体湿润。3.23离子交换柱:COOH 型固相萃取柱，500 mg,3mL。使用前用 5 mL 乙酸乙酯预洗并保持柱体湿润。4仪器和设备4. 1液相色谱-质谱/质谱联用仪：配有电喷雾离子源(ESI)。4.2离心机(2500g)。4.3 混匀器。4.4真空固相萃取装置。4.5 pH计。4.6具盖塑料离心管：50mL。4.7电子天平。5制样5.1试样的制备将抽取的样品充分混匀，均分成两份，分别装入洁净容器内，一份作为留样保存，另一份作为试样供检