SN 1680-2005蜜蜂武氏蜂盾螨病诊断方法.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 1680—2005蜜蜂武氏蜂盾螨病诊断方法Protocol of diagnosis for acariosis of bees2005-09-30发布2006-05-01实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局 SN/T言本标准参考了OIE《陆生动物诊断试剂和疫苗标准手册》2004 版。本标准的附录 A为规范性附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国北京出人境检验检疫局。本标准主要起草人：史夏玲、乔军、苏世敏。本标准系首次发布的出人境检验检疫行业标准。I SN/T 1680—2005蜜蜂武氏蜂盾螨病诊断方法1范围本标准规定了蜜蜂武氏蜂盾螨病的诊断方法。本标准适用于蜜蜂武氏蜂盾螨病的检疫。2原理蜜蜂武氏蜂盾螨病(acariosis of bees)是由蜜蜂武氏蜂盾螨引起的。是蜜蜂呼吸系统的一种体内寄生虫，主要在蜜蜂前胸气管内生活、繁殖，以寄主的血淋巴为食，有时也寄生于头、胸和腹部气囊。随着寄生螨虫数量的增加，气管逐渐出现病变，由于黑色素的缘故，原来正常的白色半透明的气管壁变成不透明并带有黑色斑点，气管内充满不同阶段的气管螨。3设备和试剂需要准备的设备和试剂为：光学显微镜；解剖镜；-8%氢氧化钾溶液；-1%亚甲基蓝溶液；-70%酒精。4方法和判定4.1解剖法4.1.1随机抽取50只蜜蜂样品（活、死或濒死），先用酒精或冷冻致死，将蜂体脚朝上，背朝下仰卧固定或用拇指和食指捏住。4.1.2用镊子去掉头和前脚，除去颈四周的颈片，打开暴露气管，查看离气孔最近的气管是否侵染。4.1.3在中部两腿到前腿之间切开胸腔,薄圆片经进一步处理,清除肌肉组织。4.1.4置8%氢氧化钾溶液（溶液配制见附录A)微加热约20min或不加热过夜浸软。4.1.5用18×～20×解剖镜检查有肌肉组织的第一对气管，或将气管移到另一载玻片上加甘油或水，以更高的放大倍数观察。4.1.6通过透明的气管壁可很容易看到小的卵圆形螨虫体。4.1.7判定：在解剖镜下检查，发现气管内有卵圆形螨虫体为阳性结果，未发现气管内有卵圆形螨虫体为阴性结果。4.2染色法4.2.1去掉头和前腿。4.2.2在前翅基部中间一对腿向前面再横切一刀。4.2.3²取下切片1mm～1.5mm,置8%氢氧化钾溶液。4.2.4轻轻搅拌，加热至接近沸点约10min，直至内部组织溶解、清除，勿动几丁质组织。4.2.5 过滤回收切片并用自来水冲洗 2 min～ 5 min。4.2.6染色：用1%亚甲基蓝（溶液配制见附录A)染色，切片在蒸馏水中分化2min～5min，用70%酒精淋洗，当用95%酒精保存时，螨可再着色6h。1 SN/T 1680—20054. 2. 7封固切片。4.2.8判定：在光学显微镜下检查，发现气管内有染色螨虫体为阳性结果，未发现气管内有染色螨虫体为阴性结果。2 SN/T 1680—2005附录A(规范性附录)溶液配制A. 18%的氢氧化钾溶液称取氢氧化钾8.0g，加蒸馏水溶解至100mL。A.21%的亚甲基蓝溶液称取亚甲基蓝1.0g,加蒸馏水溶解至100mL。 中华人民共和国出人境检验检疫行业标准蜜蜂武氏蜂盾螨病诊断方法SN/T 1680—2005*中国标准出版社出版北京复兴门外三里河北街16号邮政编码：100045网址 电话：6852394668517548中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷*开本880×12301/16印张0.5字数５千字2006年1月第一版　2006年1月第一次印刷印数 1——2 000SN/T 1680-2005