SN_T 1164.1-2011牛传染性鼻气管炎检疫技术规范.pdf

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 1164. 1---2011代替 SN/T 1164.1-2002,SN/T 1164.2—2003牛传染性鼻气管炎检疫技术规范Quarantine protocol for infectious bovine rhinotracheitis2011-05-31 发布2011-12-01 实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局 中华人民共和国出人境检验检疫行业标准牛传染性鼻气管炎检疫技术规范SN/T 1164. 1--2011*中国标准出版社出版北京复兴门外三里河北街16号邮政编码：100045网址 www. spc. net. cn电话：6852394668517548中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷*开本880×1230 1/16印张 1.25字数 33 千字2011年11月第一版　2011年11月第一次印刷印数 1—1 600*书号：155066·2-22587 SN/T 1164. 1—2011前 言本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。本标准代替SN/T1164.1—2002《牛传染性鼻气管炎病毒分离操作规程》和SN/T1164.2---2003《牛传染性鼻气管炎微量血清中和试验操作规程》。本标准与SN/T1164.1—2002和SN/T1164.2—2003相比，主要的技术性变化如下：增加了从精液样品中分离病毒的方法；删除了 SN/T 1164.12002 中 7.2.4;修改了病毒毒价测定方法；增加了实时荧光PCR方法。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国广东出人境检验检疫局、中华人民共和国云南出人境检验检疫局、中华人民共和国天津出人境检验检疫局、中华人民共和国江苏出人境检验检疫局。本标准主要起草人：罗琼、田纯见、苏卫、陈茹、林志雄、鱼海琼、董志珍、霍蕾、唐泰山、张常印。本标准所代替标准的历次版本发布情况为：-SN/T 1164.1—2002;SN/T 1164.2-2003。 SN/T 1164.1—2011牛传染性鼻气管炎检疫技术规范1 范围本标准规定了牛传染性鼻气管炎的病毒分离鉴定、微量血清中和试验、酶联免疫吸附试验、聚合酶链反应和实时荧光PCR检测技术规范。本标准适用于进出境牛的牛传染性鼻气管炎检疫和诊断。2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T 19489—2008实验室生物安全通用要求SN/T 1164.3牛传染性鼻气管炎酶联免疫吸附试验操作规程SN/T 1193基因检验实验室技术要求SN/T1918牛传染性鼻气管炎聚合酶链反应操作规程and Vaccines for Terrestrial.Animals》(2008 年)第二部分关于牛OIE《 Manual of Diagnostic传染性鼻气管炎的诊断技术规定3缩略语IBR(Infectious Bovine Rhindtracheitis):牛传染性鼻气管炎TCIDso:半数组织细胞感染量BK:原代胎牛肾细胞MDBK：牛肾传代细胞系BT:原代胎牛睾丸细胞CPE:致细胞病变作用ELISA：酶联免疫吸附试验PCR(Polymerase Chain Reaction):聚合酶链反应bp(base pair):碱基对EDTA(ethylene diaminetetraacetic acid):乙二胺四乙酸钠Taq(Taq DNA polymerase): Taq DNA 聚合酶Real-time PCR:实时荧光 PCRCt值：荧光信号量达到设定的阐值时所经历的循环数UDG(racil DNA glycosylase):尿嘧啶-DNA-糖基化酶 SN/T 1164. 1--20114检疫方法4.1 病毒分离和鉴定4.1.1材料准备器材.1无菌6孔、24孔、96孔平底组织培养板。4. 1. 1. 1. 2无菌棉拭子。4. 1. 1. 1. 310 mL无菌试管和1.5mL无菌离心管。.4细胞培养瓶.5单道、8道微量可调移液器（20 μL～200μL、100 μL～1000μL)。.6灭菌常规玻璃器材。4. 1. 1. 1.7二氧化碳培养箱。4. 1. 1. 1. 8电热恒温水浴箱。4. 1. 1. 1. 9生物安全柜。4. 1. 1. 1. 10倒置显微镜。4. 1. 1. 1. 111200 μL、1000 μL灭菌吸嘴。4. 1. 1. 1. 12冰箱（一20℃保存血清，一70℃保存种毒）。4. 1. 1.2i试剂4. 1. 1. 2. 1标准阳性,阴性血清由指