SN_T 2632-2010微生物菌种常规保藏技术规程.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 2632—2010微生物菌种常规保藏技术规程Technical codes for routine microbial culture coilection2010-12-01实施2010-05-27发布中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局数动 SN/T2632—2010言前本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。请注意本文的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国广东出人境检验检疫局。本标准主要起草人：王锦彤、黎学琴、史咏梅、陈泽瑜、陈小刚、王向阳。 SN/生物菌种常规保藏技术规程1范围本标准规定了微生物菌种保藏的基本原则和常规方法。本标准适用于微生物菌种常规保藏工作。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T4789.28食品卫生微生物学检验染色法、培养基和试剂GB19489实验室生物安全通用要求SN/T1538.1培养基制备指南第1部分：实验室培养基制备质量保证通则WS233微生物和生物医学实验室生物安全通用准则病原微生物实验室生物安全管理条例（国务院令第424号）人间传染的病原微生物菌（毒）种保藏机构管理办法（中华人民共和国卫生部令第68号）3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3. 1微生物microorganism广泛分布于自然界中的一群肉眼看不到的微小生物，包括细菌、螺旋体、立克次体、衣原体、支原体、放线菌、真菌、病毒等类，其结构简单，以单细胞、细胞群体或非细胞状态存在，在提供营养物质和适宜环境的条件下，一般都能独立生活，迅速生长繁殖。3. 2微生物菌种microbial strain可培养的具有保价值的微生物纯培养（株）。3. 3菌种保藏culturecollection微生物菌种用各种适宜的方法妥善保藏，避免死亡、污染，保持其原有性状基本稳定，以便于研究、交换和使用的目的。3.4定期移植保藏法periodic transfer on agar or in liquid medium亦称传代培养保藏法，包括斜面培养、穿刺培养、液体培养等。是指将菌种接种于适宜的培养基中，最适条件下培养，待菌种生长完全后，通常置于4℃～6℃进行保存并间隔定时间进行移植培养的菌种保藏方法。3.5液体石蜡保藏法preservation underliquidparaffin亦称矿物油保藏法，是定期移植保藏法的改良方法。是指将菌种接种在适宜的斜面培养基或半固1 SN/T 2632--2010体培养基上，最适条件下培养至对数生长期后注入灭菌的液体石蜡，使其覆盖整个斜面或半固体，再通常直立放置于4℃～10℃进行保存的一种菌种保藏方法。3.6沙土管保藏法sand preservation属于载体保藏法的一种，是指将培养好的菌种用无菌水制成悬浮液，注入灭菌的沙土管中混合均匀，或直接将菌苔或孢子刮下接种于灭菌的沙土管中，使其吸附在载体上，将管中水分抽干后熔封或石蜡封口，暨干燥器中于4℃～10℃进行保存的一种菌种保藏方法。3.7低温冷冻保藏法cryopreservation将菌种保藏在一60℃～一80℃低温冰箱中以减缓其生理活动的一种菌种保藏方法。3.8冷冻干燥保藏法freere-dlying preservation亦称冻干法，是在无菌条件虾将欲保藏的菌种制成悬浮液后漆结，在真空条件下使冰升华直至干燥，从而使微生物的生理活动趋于停止而长期维特存活状态的一种菌种保藏方法。4基本原则4.1应针对菌种的生物学性状选择适宜方法进行保藏。4.2应使保藏的菌种不染杂菌使退化和死亡降低到最低限度。4.3应保证菌种保获的安全性不能对周围环境造成污染和危害。病原微生物菌（毒）种的保藏应遵从GB19489和WS233以及《病原微生物实验室生物安全管理条例》、《人间传染的病原微生物菌（森）种保藏机构管理办法》的规定，根据病原微生物的您害类别在相应生物安全等级的实验室开展工作，且应加强个体防护和环境保护。5方法5.1定期移植保藏法按附录A的规定。5.2液体石蜡保藏法按附录B的规定。5.3沙土管保藏法按附录C的规定。5.4低温冷冻保藏法按附录D的规定。5.5冷冻干燥保藏法按附录E的规定。2 SN/T 2632-2010附录A（规范性附录）定期移植保藏法A.1适用范围本方法广泛适用于细菌、放线菌、酵母真菌等的短期保藏。A.2原理保藏培养基一般含有机氮多，糖分总量不超过2%，既能满足菌种培养时生长繁殖的需要，又可防止因产酸过多而影响菌种性能。大多数在低温