NYT 1692-2009热带牧草品种资源抗性鉴定 柱花草抗炭疽病鉴定技术规程.pdf

ICS 65.020.20B 25NY中华人民共和国农业行业标准NY/T 1692-2009热带牧草品种资源抗性鉴定柱花草抗炭疽病鉴定技术规程Guideline for identifying stylo with resistance to anthracnoseFastness identification for tropical forage resources2009-05-01实施2009-03-09发布中华人民共和国农业部发布 —2009NY/T 1692-前言本标准的附录 A 为资料性附录。本标准由中华人民共和国农业部农垦局提出。本标准由农业部热带作物及制品标准化技术委员会归口。本标准由中国热带农业科学院热带生物技术研究所、中国热带农业科学院国家重要热带作物工程技术研究中心、中国热带农业科学院热带作物品种资源研究所、海南大学环境与植物保护学院负责起草。本标准主要起草人：蒋昌顺、邹冬梅、刘文波、刘志昕。T NY/T 1692—2009热带牧草品种资源抗性鉴定柱花草抗炭疽病鉴定技术规程1范围本标准规定了柱花草抗炭疽病[Colletotrichum gloeosporioides（Penz.）Sacc.］鉴定的术语定义、试验方法和基本要求。本标准适用于柱花草（Stylosanthes spp)品种及其种质对炭疽病的抗性鉴定。2术语和定义下列术语和定义适用于本标准。2. 1抗病性resistance植物的抗病性是指植物避免、中止或阻滞病原物侵入与扩展，减轻发病和损失程度的一类特性2. 2抗病性鉴定disease resistance identification以叶片上炭疽病发生程度为衡量指标评价柱花草品种抵抗炭疽病能力的方法和过程。2. 3对照品种 reference cultivars被作为抗病性参照的、对柱花草炭疽病具有中等抗病能力的柱花草品种。2. 4柱花草炭疽病anthracnose of stylo由胶孢炭疽菌（colletotrichumgloeosporioides）侵染引起的柱花草病害。3仪器设备及试剂3.1仪器设备高压灭菌锅、超净工作台、恒温培养箱、移液枪、培养皿、培养盆、温度计、烧杯、封口膜、显微镜。3. 2 试剂葡萄糖、琼脂、灭菌水。4鉴定步骤4.1孢子悬浮液的准备将活化后的炭疽病原菌丝块接种到马铃薯培养基（200 g/L马铃薯，20g/L葡萄糖，20 g/L琼脂）上，28℃恒温培养箱培养3d～5d,用灭菌水从马铃薯培养基上洗下孢子,经无菌白纱布过滤，用计数板在显微镜下观察，调整孢子悬浮液的浓度约为 106个孢子/mL。现配现用。4.2植株接种试验用1%的次氯酸钠溶液浸泡柱花草种子 5min，灭菌水冲洗3次，室温下,在湿润的滤纸上发芽，出芽后转至培养盆中（含等体积混合的表土、塘泥、沙，并以每千克混合物补充3.6g的N-P-K复合肥）。每盆1株，每个品种10盆，3次重复。盆栽植株在网室（自然光、温度20℃～30℃）生长30d后，每株喷I NY/T 1692—2009洒孢子悬浮液直至叶片出现水滴。将植株转移到湿度90%、温度在25℃～28℃的暗房中培养2d,然后将植株转入温度为19℃～30℃的网室中培养。5调查、记录和计算方法5.1 病害分级根据发病叶片数占总叶片的百分率对植物炭疽病进行分级(表1）。表 1柱花草炭疽病的分级标准发病叶片数占总叶片的百分率(c)病害级别0r=00x≤10%1310%x≤25%525%x50%750%α≤75%α75%95.2调查方法以已经报道的柱花草炭疽病症状特点,在接种后 7d,判断待鉴定材料是否出现炭疽病,同时根据病害分级标准(表1)判定、记录各试验小区的总叶片数和各级病叶片数。获得的数据填人附录 A。5.3计算方法试验结果以小区为单元进行病情指数统计。病情指数按照式(1)计算(A. X B:)(1)DS X 100CX9式中:DS病情指数;A,———各病级值,其下标i的取值为 0、1、3、5、7 和 9;B,一对应于 A,病害级别的病叶数;C—一接种的叶片总数。6 抗病性判别6.1未取得对照品种抗病性资料的抗病性判别将每次试验各处理的所有重复的病情指数加和平均，然后再将多次试验的病情指数加和平均值平均,得到的病情指数平均值用 ADS 表示。用 ADS 判断柱花草对炭疽病的抗病性(表 2)。表 2未取得对照品种抗病性资料的柱花草对炭疽病抗病性的判断标准抗病性病情指数平均值(ADS)免疫ADS=0高抗0ADS3%中抗3%ADS≤10%中感10%ADS20%高感ADS20%6.2已经取得对照品种抗病性资料的抗病性判别以 ADS数据进行方差分析,并用邓肯氏新复极差(DMRT)法对试验数据进行统计分析。根据统计结论,按表 3 的判断标准判断柱花草对炭疽病的抗病性2 NY/