SN_T 3567.9-2017交叉引物恒温扩增检测方法 第9部分：鼠疫耶尔森菌.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 3567.9—2017交叉引物恒温扩增检测方法第9部分：鼠疫耶尔森菌Detection method of crossing priming isothermal amplification-Part 9:Yersinia pestis2017-07-21发布2018-03-01实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局 SN/T3567.9—2017前言SN/T3567《交叉引物恒温扩增检测方法》分为11个部分：第1部分：通用技术规程；第2部分：霍乱弧菌；第3部分：大肠杆菌O157：H7；第4部分：黄热病毒；第5部分：沙门菌属；第6部分：结核分枝杆菌；第7部分：肠道病毒71型；第8部分：症原虫；第9部分：鼠疫耶尔森菌；第10部分：炭疽芽孢杆菌；第11部分：志贺菌。本部分为SN/T3567的第9部分。本部分按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本部分起草单位：中华人民共和国天津出人境检验检疫局、中华人民共和国河北出入境检验检疫局、杭州优思达生物技术有限公司。本部分主要起草人：王馨、关淳、兰景、李浩辰、祁军、胡林、尤其敏。 SN/T 3567.9—2017交叉引物恒温扩增检测方法第9部分：鼠疫耶尔森菌1范围SN/T3567的本部分规定了国境口岸鼠疫耶尔森菌交叉引物恒温扩增法检测的对象、检测程序及检测结果的报告。本部分适用于鼠疫耶尔森菌筛查检测，以及对国境口岸出入境人员感染鼠疫耶尔森菌的实验室检测。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB19489实验室生物安全通用要求SN/T1280—2014国境口岸鼠疫检验规程WS279—2008鼠疫诊断标准人间传染的病原微生物名录（卫生部2006）3术语和定义下列术语和定义适用于本文件3.1crossing priming isothermal amplification;CPA交叉引物恒温扩增技术一种核酸恒温扩增技术，CPA恒温扩增体系中除包含具有链置换功能的DNA聚合酶（DNAPolymerase)外，还主要包括交叉引物、剥离引物和检测引物。这些寡聚核苷酸链能依靠该DNA聚合酶的高活性的链置换特性，使脱氧核糖核酸(Deoxyribonucleic Acid,DNA)的循环扩增能不断的实现。3.2交叉引物crossingprimer用于交叉扩增的主要引物，其中正向引物的5末端序列与反向引物的杂交序列相同，而反向引物的5末端序列与正向引物的杂交序列相同，因此在扩增过程中这两条引物互相引人对方的杂交序列，增加引物的杂交位点，促进扩增反应。3.3剥离引物bumperprimer位于交叉扩增引物后方的短链引物，其作用是在链置换DNA聚合酶的作用下，将扩增引物的延伸链从模板上剥离。1 SN/T3567.9—20173.4检测引物detectionprimer-对位于交叉引物内侧的短链引物，需要用半抗原或荧光素标记，其作用是使扩增产物带有该标记，以用于检测。3.5Bst DNA聚合酶Bst DNA polymerase嗜热脂肪芽孢杆菌（Bacillusstearothermophilus）DNA聚合酶的部分片段，保留了其5→3DNA聚合酶活性，但是去除了5→3核酸外切酶活性。BstDNA聚合酶最主要的特性是具有超强的链置换功能（StrandDisplacement)。4缩略语下列缩略语适用于本文件。dNTPs：脱氧核苷三磷酸(deoxyribonucleosidetriphosphate)dATP：脱氧腺苷三磷酸（deoxyadenosinetriphosphate）dTTP：脱氧胸苷三磷酸（deoxythymidine triphosphate)dCTP：脱氧胞苷三磷酸（deoxycytidinetriphosphate)dGTP：脱氧鸟苷三磷酸（deoxyguanosinetriphosphate)5生物安全措施为了保护实验室人员的安全，按照GB19489和原卫生部颁布的《人间传染的病原微生物名录》（2006)中的有关规定，应由具备相关资格的工作人员进行实验操作。所有废弃物也应按照GB19489中的有关规定执行。6检测对象6.1鼠疫耶尔森菌菌株。6.2急热待查疑似感染鼠疫病人的淋巴结穿刺液、痰液、组织液等。7试剂和材料7.1除另有规定外，所使用的试剂为分析纯或生化试剂，水为按照GB/T6682规定的一级水。7.2DNA提取试剂：5%Chel