SN_T 2609-2010国境口岸流感、副流感、呼吸道合胞病毒的酶联免疫吸附试验检测方法.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 2609-—2010国境口岸流感、副流感、呼吸道合胞病毒的酶联免疫吸附试验检测方法Enzyme-linked immunosorbent assay for detection of influenza virus.parainfluenza virus,respiratory syncytial virus2010-05-27发布2010-12-01实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局敏码防透 SN/T 2609—2010前 言本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中国检验检疫科学研究院、中华人民共和国江西出入境检验检疫局、中华人民共和国上海出入境检验检疫局。本标准主要起草人：孙肖红、王建军、张琳、杨宇、张乐、张晓龙、刘岚、黄晶晶、胡孔新、王静。 SN/T2609—2010国境口岸流感、副流感、呼吸道合胞病毒的酶联免疫吸附试验检测方法1 范围本标准规定了国境口岸流感病毒、副流感病毒、呼吸道合胞病毒抗体（1gG/IgM)的检测对象及方法。本标准适用于国境口岸入出境人员、可疑流感病毒或呼吸道合胞病毒感染者等人群的流感病毒、副流感病毒、呼吸道合胞病毒抗体(1gG/IgM)检测的酶联免疫吸附试验，其他人群的抗体检测也可参照。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB19489实验室生物安全通用要求3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3. 1甲型流感病毒influenzavirusA甲型流感病毒是八节段RNA病毒，属正粘病毒科，感染人可引起流感。3.2乙型流感病毒influenzavirusB乙型流感病毒是八节段RNA病毒，属正粘病毒科，感染人可引起流感。3.3副流感病毒parainfluenzavirus副流感病毒属副粘病毒科，基因组为单股负链RNA，感染人可引起普通感冒、气管炎和肺炎。3.4呼吸道合胞病毒respiratorysyncytialvirus，Rsv呼吸道合胞病属副粘病藓科，基因组为单股负链RNA，是世界范围内婴幼儿病毒性下呼吸道感染最重要的病毒病原。3. 5酶联免疫吸附试验enzyme linked immunosorbentassay,ELISA本标准采用间接法，其原理是在固相包被板上包被抗原，用特异性抗人IgG/IgM的酶标二抗检测结合到包被板上的样品中的特异性IgG/IgM抗体。底物反应后，所显示的颜色强度与样品中IgG/1gM的含量成正比，IgG/IgM·的含量可以通过标准曲线获得。 SN/T 2609-20104试验材料4.1试剂4.1.1包被板：分别包被有甲型流感病毒、乙型流感病毒、副流感病毒、呼吸道合胞病毒抗原的96孔板，可拆。4.1.2酶标抗人IgG/IgM抗体。4.1.3TMB底物液。4.1.4终止液（1nol/LH2SO4）。4.1.5洗涤液：PES-T缓冲液。4.1.6稀释液：PBS缓冲液。4.2检验对象在国际旅行卫生保健中心体检的人出境人员国境口岸可疑流感病毒、副流感病毒、呼吸道合胞病毒感染者，或申请检验的人员。4.3待检血清无菌采集检验对象静脉血2mll~3mL，自然凝固1h~2h，1500g~2000g离心5min，收集血清于2mL无菌螺旧塑料管中。5设备5.1酶联检测仪（能在450nm处读5. 2洗板机。5.3普通冰箱（4℃和-20℃）。5. 4普通台式离心机。5. 5微量可调移液器及配套吸头：10u100、1000uL。5.62mL无菌螺口塑料管。5.7涡旋器。5.8ⅡI级生物安全柜。5.9恒温培养箱。6实验室检测6.1方法提要6.1.1操作过程在包被有抗原的固相包被板上，用特异性抗人IgG/IgM的酶标二抗检测结合到包被板上的样品中的特异性IgG/IgM抗体。底物反应后，所显示的颜色强度与样品中IgG/IgM的含量成正比，IgG/IgM的含量可以通过标准曲线获得。6.1.2待检血清的稀释和处理根据所用试剂盒的要求，将血清标本用稀释缓冲液稀释成不同浓度，加人不同比例的类风湿因子2 SN/T 2609—2010（RF）吸附剂，在涡旋器上充分混合，37℃孵育15min，备用。6.2技术要求甲型流感病毒、乙型流感病毒、副流感病毒和呼吸道合胞病毒抗体（IgG/IgM)的ELISA检测方法分别参见附录A、附录B、附录C、附录D、附录E。7质控根据所用试剂盒的要求，设空白对照孔、阴性对照孔、阳性对照、标准品孔。结果报告88.1绘制标准曲线以标准品的OD值为Y轴，标准品的浓度为x轴，在半对数唑标纸上绘制标准曲线。每次试验均应重新绘制