SN_T 4394-2015出口食品中红木素和降红木素的测定 液相色谱法.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 4394—2015出口食品中红木素和降红木素的测定液相色谱法Determination of bixin and norbixin in foods for export--LC method2015-12-04 发布2016-07-01实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局 SN/T 4394—2015前言本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国福建出人境检验检疫局。本标准主要起草人：钱疆、陈健、刘正才、黄杰、陈章捷、赵建晖、杨方、张玉燕、薛方财。I SN/T 4394—2015出口食品中红木素和降红木素的测定液相色谱法1 范围本标准规定了出口食品中红木素和降红木素含量测定的液相色谱方法。本标准适用于奶酪、麦片、方便面、焙烤食品、饮料、火腿肠、复合调味料、巧克力、膨化食品中红木素和降红木素的定量测定。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3方法提要试样中红木素和降红木素采用氨水乙醇溶液提取，经石油醚脱脂，乙酸酸化后采用二氯甲烷反提取，提取液浓缩后，采用反相色谱柱分离，液相色谱-紫外可见分光光度测定，外标法定量。4试剂和材料除非另有说明，所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。4.1无水乙醇：色谱纯。4.2氨水，浓度含量为25%~28%4.32,6-二叔丁基-4-甲基苯酚（简称BHT)。4.4硅藻土，商品名为Celite545或者相当产品。4.5石油醚：30℃～60℃沸程。4.6冰乙酸，浓度≥99%。4.7二氯甲烷，色谱纯。4.8乙腈，色谱纯。4.9甲醇，色谱纯。4.10提取液：量取50mL氨水（4.2）与950mL无水乙醇（4.1），混匀，加人1gBHT（4.3），振荡溶解。4.11含0.1%BHT的甲醇溶液，称取0.5gBHT，用500mL甲醇（4.9)溶解。4.12含0.1%BHT的乙醇溶液：称取0.5gBHT，用500mL无水乙醇溶解，4.1370%乙腈溶液：量取350mL乙腈（4.8）和150mL去离子水，混合均匀，加人0.5gBHT，振荡溶解。4.14除脂液：称取0.5gBHT，用500mL石油醚（4.5）溶解。4.15反提取溶液：取0.5gBHT，用500mL二氯甲烷（4.7)溶解。4.16标准物质：顺式构型红木素和顺式降红木素标准物质，纯度≥98.0%，标准物质信息参见表A.1。1 SN/T 4394-—20154.17标准储备液：准确称取经折算含量的降红木素和红木素标准物质（4.16)10.0mg于100mL棕色容量瓶，分别用甲醇溶液（4.11)和乙醇溶液（4.12）配制成浓度为100μg/mL的标准储备溶液。该溶液一18℃下避光保存，有效期6个月。4.18标准工作溶液：取标准储备液（4.17），用乙睛溶液（4.13）稀释成0.50μg/mL、1.00μg/mL、2.00μg/mL、5.00μg/mL、10.0μg/mL、20.0μg/mL、50.0μg/mL、100μg/mL的标准工作液。4.19含顺、反构型混合溶液的制备：各取5.0mL的红木素和降红木素的储备液（4.17），用无水乙醇（4.1)稀释定容于50mL无色透明容量瓶中，置于阳光下直射2h，获得含有顺反构型的混合溶液。混合构型的色谱保留参见图B.2。此混合溶液一18℃下避光保存，有效期15天，5仪器和设备5.1液相色谱仪：配有二极管阵列检测器或多波长紫外光可见光检测器。5.2具塞塑料离心管：50mL容积。5.3电子天平：感量分别为0.01g、0.001g。5.4涡旋混匀器，转速可达3000r/min。5.5低速离心机：转速可达3000r/min。5.67棕色鸡心浓缩瓶，150mL容积。5.7旋转蒸发浓缩仪。5.8棕色容量瓶或者带棕色刻度试管，5.00mL。6.测定步骤6.1提取6.1.1麦片、方便面、焙烤食品、复合调味料、膨化食品称取试样5g（精确到0.01g）于50.mL离心管中（5.2），加入20mL提取液（4.10），3000r/min涡旋振荡2min，3000r/min低速离心，转移上清液于150mL棕色鸡心浓缩瓶（5.6），重复提取两次，合并提取液至鸡心浓缩瓶，40℃下采用旋转蒸发仪浓缩至体积5mL左右，样液转移到另二支50mL塑料离心管内，加人1mL氨水（4.2）5mL去离子水，5mL含0.1%BHT的乙醇溶液（4.12），加人