SC_T 7016.3-2012鱼类细胞系 第3部分：草鱼卵巢细胞系(CO).pdf

ICS 65.150B 50SC中华人民共和国水产行业标准SC/T 7016.3—2012鱼类细胞系第3部分：草鱼卵巢细胞系(CO)Fish cell lines--Part 3 :Grass carp ovary cell line (CO)2012-12-07 发布2013-03-01实施中华人民共和国农业部发布 SC/T 7016. 3—2012前言SC/T7016《鱼类细胞系》分为下列部分：第1部分：胖头肌肉细胞系(FHM);一第2部分：草鱼肾细胞系(CIK)；第3部分：草鱼卵巢细胞系（CO)；-第 4 部分:虹鳟性腺细胞系(RTG~2);第5部分：鲤上皮瘤细胞系（EPC)；-第6部分:大鳞大麻哈鱼胚胎细胞系(CHSE);-第 7 部分:棕鲫细胞系(BB);第8部分:斑点叉尾鲫卵巢细胞系(CCO);第9部分：蓝鳃太阳鱼细胞系（BF-2)；第10部分：狗鱼性腺细胞系(PG)；-第11部分：虹鳟肝细胞系（R1);-第12 部分:鲤白血球细胞系(CLC);本部分为SC/T7016的第3部分。本部分按照GB/T 1.1给出的规则起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本部分由农业部渔业局提出。本部分由全国水产标准化技术委员会(SAC/TC156)归口。本部分起草单位：全国水产技术推广总站、深圳出人境检验检疫局。本部分主要起草人：陈爱平、高隆英、张利峰、徐立蒲、钱冬、刘琪。I SC/T 7016. 3—2012鱼类细胞系第 3 部分：草鱼卵巢细胞系(CO)1 范围本部分描述了草鱼卵巢细胞系(grass carp ovary cell linc,CO)的形态、传代培养条件、生长特性、针对部分水生动物病毒的敏感谱及传代细胞的质量控制。本部分适用于对草鱼卵巢细胞系的培养、使用和保藏。2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3术语和定义3. 1草鱼卵巢细胞系grass carp ovary cell line,CO陈燕新、李正秋1978年从草鱼（Ctenopharyngodon idella）卵巢组织细胞经原代培养、衍生的连续细胞。4细胞的形态、大小与特性4.1 形态为上皮样细胞(参见图A.1)。4.2　大小经细胞实时分析系统测定细胞悬浮后的平均直径约为11.78μm,其中最大量细胞的峰值直径约为9. 92 μm(参见 B. 2)。4.3特性4.3.1生长特性贴壁生长。4.3.2对部分水生动物病病原的敏感性CO对鲤春病毒血症病毒(Spring viracmia of carp virus,SVCV)、草鱼出血病病毒(Grass carp rco-virus,GCRV)、鲤呼肠孤病毒(Carp reovirus）、甲鱼虹彩病毒（Soft shelled turtlc iridovirus,STIV)等病毒敏感,接种后的 CPE形态参见附录 A。5主要材料与仪器设备5.1 水应符合GB/T 6682中一级水的规定。5.2细胞培养液主要成分见C.1。11 SC/T 7016. 3--20125.3细胞消化液主要成分及其含量见C.2。5.4仪器设备主要包括：生化培养箱、超净工作台、真空泵和废液瓶等培养细胞所用的设备；倒置显微镜；一血球计数板或电子细胞计数仪；细胞培养瓶、移液器或洗耳球以及移液管等培养细胞所用的耗材。6细胞培养条件6.1 培养温度细胞置生化培养箱内，在15℃~～28℃下培养，其最适生长温度为25℃。6.2 培养液 pII7.2~7.6。7 细胞传代与保藏7.1传代程序7.1.1吸弃旧培养液置于超淨工作台内，无菌环境下吸弃长满单层CO的细胞培养瓶中的旧培养液。7.1.2消化细胞用细胞消化液消化分散细胞。沿细胞培养瓶一侧加入细胞消化液，一般在50mL细胞培养瓶中加人5mL左右或按细胞培养瓶培养面每平方厘米加人0.1mL～0.2mL，加人量必须完全浸没细胞层。贴壁长满的CO消化时间一般为 1.5min～3min，细胞开始呈雾状之后吸弃细胞消化液，轻轻拍打培养瓶以分散细胞。7.1.3更换细胞培养液与分瓶将消化液吸弃后，在50mL细胞培养瓶中加人10mL～15mL细胞培养液（见C.1），按每瓶5mL分成2瓶～3瓶，使细胞浓度达到1×105个/mL。分瓶后在25℃下培养,8h内细胞贴壁并生长；18h后能基本长满单层细胞。不同规格的细胞培养瓶按培养面每平方匾米加人 0.1ml.～0.2mL的细胞培养液。7.1.4细胞的传代周期细胞长满单层5d后再次传代较好。7.2细胞的保藏7.2.1保藏条件7. 2. 1. 1 温度与天数传代