DB23T 3529-2023 玉米抗丝黑穗病多标记分子辅助育种技术规程.docxVIP

ICS65.020.20CCSB 21 ICS 65.020.20 CCS B 21 黑 龙 江 省 地 方 标 准 DB23/T 3529—2023 玉米抗丝黑穗病多标记分子辅助育种技术规程 2023 - 07 - 21 发布 2023 - 08 - 20 实施 黑龙江省市场监督管理局 发 布 DB23/T 3529 DB23/T 3529—2023 前 言 本文件按照GB/T 1.1—2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。 请注意除上述专利外，本文件的某些内容可能仍涉及专利，本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本文件由黑龙江省农业农村厅提出。本文件起草单位：东北农业大学。 本文件主要起草人：王振华，邸宏，周羽，张林，宋永峰，刘显君，董玲，曾兴，李春翔，贾悦， 周润宇，朱勇。 I 引 言 本文件的发布机构提请注意，声明符合本文件时涉及专利——（1）与玉米抗丝黑穗病次主效位点紧密连锁的分子标记DNdCaps8.03-1及其应用，专利号：ZL201611147933.9；（2）基于玉米抗丝黑穗病候选基因ZmNL开发的分子标记LSdCAP8及其应用，专利号：ZL201410675830.4；（3）与玉米抗丝黑穗病基因连锁的SNP位点、基于该位点的分子标记LSdCAP3及其应用，专利号：ZL201210031213.1；（4）与玉米抗丝黑穗病基因连锁的SNP 位点、基于该位点的分子标记LSdCAP2 及其应用， 专利号： ZL201210031438.7。本文件的发布机构对于该专利的真实性、有效性和范围无任何立场。该专利的持有人已向本文件的发布机构保证，他愿意同任何申请人在合理、无歧视的条款和条件下就专利授权可进行谈判，该专利持有人的声明已在本文件的发布机构备案。相关信息可通过以下联系方式获取： 专利持有人：东北农业大学 地址：黑龙江省哈尔滨市香坊区长江路600号邮政编码：150030 联系人：周羽 联系电话：0451邮箱： zhouyu0924@126.com II 玉米抗丝黑穗病多标记分子辅助育种技术规程 范围 本文件规定了玉米抗丝黑穗病多标记分子辅助育种技术的术语和定义、仪器、育种材料及育种程序。本文件适用于玉米(Zea mays L.）抗丝黑穗病多标记分子辅助育种。 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 NY/T 1248.3-2006 玉米抗病虫性鉴定技术规范 第3部分：玉米抗丝黑穗病鉴定技术规范NY/T 1432-2014 玉米品种鉴定技术规程 SSR标记法 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 玉米丝黑穗病 maize head smut 由丝轴黑粉菌（Sphacelotheca reiliana (Kühn) Clint. ）侵染所引起的玉米真菌性病害。 3.2 标记辅助选择 利用与目标性状紧密连锁的分子标记对目标性状进行选择的育种技术。 3.3 多标记组合 与育种目标性状紧密连锁的2个及以上的分子标记组合。 3.4 前景选择标记 用于检测目标性状的分子标记。 3.5 背景选择标记 用于检测试验材料遗传背景的分子标记。 仪器 DNA 提取仪器 研钵、核酸提取磨样机、水浴锅、移液器、低温高速离心机和通风橱等。 PCR 检测仪器 1 PCR仪、移液器、电泳仪、电泳槽和凝胶成像系统。 育种材料 受体亲本 选取农艺性状优良但感或高感丝黑穗病的玉米自交系，且不具有bin2.09主效抗病位点/基因和bin8.03次主效抗病位点的玉米自交系，作为感病受体亲本（P1）。 供体亲本 选取在田间表现为高抗丝黑穗病，且具有bin2.09主效抗病位点/基因和bin8.03次主效抗病位点的玉米自交系，作为抗病供体亲本（P2）。 育种程序 杂交 以P1为母本，以P2为父本，人工授粉杂交，获得F1代杂交种子。 回交 以F1为母本，以P1为父本，人工授粉杂交，获得BC1F1世代杂交种子。 BC1F1 基因分型 采样 BC1F1世代杂交种子样品可以是种子的胚乳、幼苗的叶片等可用于DNA提取的玉米植物组织。样品采集后立刻用于DNA提取或冷冻保存。采样时应记录每个样品名称、样品编号、采样地点和时间等。 DNA 提取 按照NY/T 1432-2014中9.2的要求进行。 前景选择 标记信息 使用的分子标记为玉米抗丝黑穗病bin2.09主效和bin8.03次主效QTL所在位点的连锁标记或抗病基因的功能标记，见附录A。 PCR 扩增和酶切 采用20 μ L