NY_T 2313-2013甘蓝抗枯萎病鉴定技术规程.pdf

ICS 65.020B 16NY中华人民共和国农业行业标准NY/T 2313—2013甘蓝抗枯萎病鉴定技术规程Rule for evaluation of cabbage resistance to fusarium wilt2013-08-01实施2013-05-20发布中华人民共和国农业部）发布 NY/T2313—2013前言本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。本标准由农业部种植业管理司提出。本标准由全国蔬菜标准化技术委员会(SAC/TC467)归口。本标准起草单位：中国农业科学院蔬菜花卉研究所。本标准主要起草人：杨宇红、谢丙炎、冯兰香、杨翠荣、龚慧芝、振川、陈国华、凌键。 NY/T2313—2013甘蓝抗枯萎病鉴定技术规程1范围本标准规定了甘蓝抗枯萎病鉴定方法和评价方法。本标准适用于甘蓝（BrassicaoleraceaL.）抗枯萎病的室内鉴定及抗性评价。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。NY/T1857.3黄瓜抗枯萎病鉴定技术规程3术语和定义NY/T1857.3界定的以及下列术语和定义适用于本文件。3. 1甘蓝枯萎病cabbage fusariumwilt由尖孢镰刀菌黏团专化型[FusariumorysporumSchl.f.sp.conglutinans（Wollenw.）SnyderHansen所引起的植株一侧或整个下部叶片黄化，叶柄和茎部的维管组织变褐，植株小而萎，病株逐渐死亡等症状为主的甘蓝土传病害。4试剂与耗材4.1PL培养液马铃薯去皮切片，称取200g，加1000mL蒸馏水，煮沸10min～20min，用纱布过滤，补加蒸馏水至1000mL，加人乳糖20g，溶化后于121℃高压灭菌30min。4.2PDA培养基马铃薯去皮切片，称取200g，加1000mL蒸馏水，煮沸10min～20min，用纱布过滤，补加蒸馏水至1000mL，加20g琼脂粉，加热溶化后，再加人葡萄糖20g，搅拌均匀并溶化后，于121℃高压灭菌30 min。4.31%的次氯酸钠(NaCIO)溶液取1mL次氯酸钠于99mL灭菌水中，摇匀。4.4耗材培养皿、锥形瓶、纱布、酒精灯、育苗钵、育苗盘等。5仪器设备恒温摇床、恒温培养箱、冰箱、灭菌锅、超净工作台、显微镜、移液器、血球计数板。6枯萎病菌接种体制备6.1病原物分离从甘蓝枯萎病发病植株叶柄、茎基部用常规组织分离法分离枯萎病病原物。分离物鉴定参见附录A。确认为尖孢镰刀菌黏团专化型（Fusariumorysporumf.sp.conglutinans）后，采用单孢分离法进行1 NY/T2313—2013分离物纯化，经科赫（koch)法则验证后，保存备用。6.2生理小种鉴定对用于抗病性鉴定接种的病原分离物进行生理小种的鉴定，鉴定方法参见B.2。6.3接种体繁殖和保存6.3.1接种体的繁殖使用国内优势小种小种1作为接种病原物。繁殖方法为：将保存的甘蓝枯萎病菌置于25℃PDA平板培养基上培养3d活化后，接种于盛有PL培养液的锥形瓶中，置于25℃～28℃摇床上，以120rpm振荡培养3d～4d。培养液经两层医用纱布过滤即得以小型孢子为主的孢子悬浮液，然后用蒸馏水稀释滤液至所需接种浓度。6.3.2病原物保存常用保存方法为将甘蓝枯萎病菌接种于PDA斜面培养基上，在25℃的恒温箱中培养7d，置4℃～8℃冰箱内保存；或在斜面上加一层灭菌矿物油（超过斜面顶部1cm)后置冰箱冷藏室或室温下保存。将甘蓝枯萎病菌接种于含20%丙三醇的液体中，置一80℃冰箱中冷冻保存。7室内抗性鉴定7.1鉴定室人工接种鉴定室应具备人工调节温度、湿度及光照的条件，使人工接种后具备良好的发病环境7.2鉴定设计鉴定材料随机排列或顺序排列，每份鉴定材料重复3次，每一重复10株苗。7.3鉴定对照材料设甘蓝品种“珍奇”为抗病对照品种，“北农早生”为感病对照品种。7.4鉴定材料育苗鉴定种子在1%的次氯酸钠溶液中浸种5min～10min，清水冲洗后置于25℃的恒温培养箱中催芽，种子萌发后播种于育苗盘内。育苗基质为草炭、蛭石和菜田土（2：1：1），经高温蒸汽灭菌（134℃，30min）。在日光温室里育苗，室内温度白天为20℃～25℃，夜晚为18℃～20℃。所有幼苗应生长健壮、一致。7.5接种7.5.1接种时期甘蓝生育期2叶期～3叶期7.5.2接种浓度接种体悬浮液的浓度为1×10°孢子/mL。7.5.3接种方法接种采用浸根接种法。将幼苗连根轻轻拔起后抖落干净根部泥土，然后将根全部浸于接种悬浮液内10min15min，将接种后的甘蓝苗定植于装有育苗基质的育苗钵中，每钵1株7.6接种后管理接种后将植株置于鉴定室内，每