SN_T 1280-2014国境口岸鼠疫检验规程.pdf

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 1280-2014代替 SN/T1280—2003国境口岸鼠疫检验规程Inspection codes for plague at frontier port2014-11-01实施2014-04-09发布中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局 SN/T 1280--2014前言本标准按照GB/T 1.12009给出的规则起草。本标准代替SN/T1280—2003《国境口岸鼠疫检验规程》。本标准与SN/T1280—2003相比，主要技术变化如下：修改了规范性引用文件：“GB15991-1995修改为WS279”一修改了要求：“专用实验室”修改为“卫生部《人间传染的病原微生物名录》规定的相应等级的生物安全实验室”，“条件具备用聚合酶链式反应（PCR)”修改为用鼠疫特异抗原和抗体检测及基因检测”;修改了检验程序；修改了结果判定；修改了附录A、附录B、附录 D,附录B修改为规范性附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国内蒙古出人境检验检疫局、中华人民共和国天津出人境检验检疫局和中华人民共和国黑龙江出入境检验检疫局。本标准主要起草人：王东胜、乔舜、魏怀波、田丽、孟东平、孙利。本标准所代替标准的历次版本发布情况为：SN/T1280一2003。 SN/T 1280--2014国境口岸鼠疫检验规程1范围本标准规定了国境口岸鼠疫检验的实验室生物安全规范、材料的采集、保存和运输、检验程序、结果判定。本标准适用于国境口岸检验检疫工作中鼠疫的实验室检验。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单)适用于本文件。WS 279鼠疫诊断标准《人间传染的病原微生物名录》（卫生部）《可感染人类的高致病性病原微生物菌（毒)种或样本运输管理规定》（卫生部）3要求鼠疫菌检验应在卫生部《人间传染的病原微生物名录》规定的相应等级的生物安全实验室内进行。3.13.2检验人员应熟悉并遵守实验室管理制度、自身防护制度、技术操作规程等，见附录A。3.3应两人以上同时进人实验室工作。3.4及时准确做好检验的各项实验记录。3.5用鼠疫特异抗原和抗体检测（见WS279）及基因检测（见附录B），进行口岸鼠疫的快速初步检验。4准备4.1设备和材料天平；离心机、离心管；震荡器；温箱；显微镜；解剖盘、剪刀、短镊子；带盖白瓷缸；接种棒、白金耳；平Ⅲ;灭菌小试管;1 mL注射器;血凝微量板、稀释棒;定量滴头。4.2培养基和试剂4.2.1鼠疫菌检验95%乙醇;生理盐水;革兰氏、美兰染液;溶血(0.1%)赫氏琼脂平板培养基(培养基的制备见附录C);龙胆紫［(1：10万）～（1：20万)］亚硫酸钠（0.025%)平板或龙胆紫溶血平板培养基；鼠疫噬菌体。4.2.2间接血凝试验(IHA)2.5%F1抗原致敏血球。用细菌凝集效价为1：320以上的鼠疫全菌免疫血清滴定、血凝滴度应不低于1：40000；与假结核血清交叉滴定、滴度应不高于1：5符合上两项规定的致敏血球为合格诊断用血球，每一鼠疫季节开始前或更换致敏血球批号时应进行上述滴定。1 SN/T 1280—201%正常兔血清盐水。2.5%单宁酸血球。 Fl 抗原液(50 μg/mL～100 μg/mL)。4.2.3反向血凝试验(RIHA)2.5%鼠疫抗体致敏血球;1%正常兔血清盐水；鼠疫诊断血清。5疑似鼠疫材料的采取、保存和运输按附录 D的规定执行。6检验程序6.1鼠疫菌检验6.1.1镜检涂片.1取材腺、肝、脾、肺、心，用切面在洁净玻片上压印或涂成薄片；或取骨髓、脑脊液及各种渗出液、痰，用接种环直接涂片。至少2张，室温下自然干燥，人体及自死动物材料至少涂4张片。.2用95%乙醇或乙醇、乙醚各半配制的固定液固定10 min,取出自然干燥。染色涂片进行革兰氏染色和美兰染色。镜检发现革兰氏阴性、两极浓染、两端钝圆的短小球杆菌，为符合鼠疫菌的特点。注意腐败材料或陈旧材料菌本身形态的变化。6.1.2细菌培养按WS279的规定执行。6.1.3鼠疫噬菌体裂解试验按WS279的规定执行。6.1.4动物接种按WS279 的规定执行。6.2血清学检验6.2.1间接血凝试验(IHA)按WS279的规定执行。6.2.2反向血凝试验(RIHA)按WS279的规定执行。2 SN/T 1280—20141结果判定7.1鼠疫菌判定依据按WS279的规定判定。7.2间接血凝试验的结果判定按WS279的规定判定。7.3反向血凝试验的结果判定按 WS279的规定判定。3 SN/T 1280—2014附录A（规范性附录）鼠疫实验室生物安全规范A.1导言由于鼠疫菌特别危险的性质,对鼠疫实验室有不