SN 1607-2005进出口饮料中菌落总数、大肠菌群、粪大肠菌群、大肠杆菌计数方法 疏水栅格滤膜法.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 1607—2005进出口饮料中菌落总数、大肠菌群、粪大肠菌群、大肠杆菌计数方法疏水栅格滤膜法Total bacterial count,coliform, fecal coliform and Escherichia colicounts in drink for import and export-Hydrophobic grid membrane filtration method2005-08-18发布2006-02-01实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局 中华人民共和国出入境检验检疫行业标推进出口饮料中菌落总数、大肠菡群、粪大肠菌群、大肠杆菌计数方法疏水栅格滤膜法SN/T中国标准出版社出版发行北京复兴门外三里河北街16号邮政编码：100045网址 www. bzcbs. com电话：6852394668517548中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷*开本 880×12301/16印张 0.5字数 ８千字2005年11月第一版2005年11月第一次印刷*如有印装差错由本社发行中心调换版权专有侵权必究举报电话：（010SN/T 1607—2005前言本标准的附录 A 是规范性附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准主要起草单位：中华人民共和国上海出人境检验检疫局。本标准主要起草人：关嵘。本标准系首次发布的出人境检验检疫行业标准。I SN/T 1607—2005进出口饮料中菌落总数、大肠菌群、粪大肠菌群、大肠杆菌计数方法疏水栅格滤膜法1 范围本标准规定了进出口饮料中菌落总数、大肠菌群、粪大肠菌群和大肠杆菌的计数方法疏水栅格滤膜法。本标准适用于进出口饮用天然矿泉水、瓶(桶)装饮用纯净水、茶饮料和碳酸饮料的测定。2方法提要一定数量的样液通过滤膜时,细菌被截留在滤膜的方格内,将滤膜置于培养基上培养后,计数细菌生长的方格数就可测得菌落总数若将滤膜量于选择性培养基上培养后，阳性菌落呈现特定颜色，计数这些特定颤色的阳性菌落方格数，则可测得样品中阳性菌落的数目。3 培养基和试剂3.1 胰化大豆坚固绿琼脂见附录 A。3.2 MFC 琼脂见附录 A。3.3胰化大豆硫酸镁琼脂见附录 A。3.4胰蛋白陈胆汁琼脂见附录 A。3.5 吲哚试剂见附录 A。3.6 无菌生理盐水。.4设备和材料4.1 疏水栅格滤膜:孔径为 0.45 μm。4.2 滤器。4.3±培养箱：36℃±1℃,44.5℃±0.5℃。4.4 真空泵。4.5 抽滤瓶。4.6无菌镊子。4.7吸管：以0.1 mL 为刻度的1mL吸管,以1mL为刻度的 10 mL吸管。4.8高压灭菌器。4.9 培养Ⅲ;直径 90 mm。4.10 滤纸。5 试样制备5.1细菌含量低的样品可用无菌吸管吸取50ml.直接过滤。5.2根据对样品污染情况的估计，用无菌生理盐水将样品制成一系列10倍递增的样品稀释液。制备样品全过程不得超过15min，然后用50mL样品稀释液过滤。1 SN/T 1607—20056 测定步骤6. 1 过滤将灭过菌的过滤装置连接到抽滤瓶上，用无菌镊子夹取滤膜，然后将滤膜放至滤器底部，并用夹子固定。无菌吸取 50mL样液至滤器内，打开真空泵电源进行抽滤，当全部样液滤过后，再另加15mL无菌生理盐水至滤器，进行同样的抽滤，当全部液体通过滤膜后，关闭真空泵电源，移去夹子，打开滤器，用无菌镊子移取滤膜。同一样品做两次测定。6. 2菌落总数测定6.2.1 培养将6.1的滤膜紧贴至胰化大豆坚固绿琼脂平板上，滤膜与琼脂之间应无气泡。36℃士1℃培养48 h.6.2.2计数计数所有细菌生长的方格数，取两次计数的平均值，按式(1)求得每毫升样品中的菌落总数。X = DM/50.(1)式中:X一一为每毫升菌落数;M一为阳性菌落方格数,单位为个,D--为稀释度。6.3大肠菌群测定6.3.1 培养将 6.1的滤膜紧贴至MFC琼脂平板上，滤膜与琼脂之间应无气泡。36℃士1℃培养24 h士2h。6.3.2计数计数所有蓝色的阳性菌落方格数，取两次计数的平均值，按式(1)求得每毫升样品中的大肠菌群数。6. 4 粪大肠菌群测定6.4.1 培养将 6.1 的滤膜紧贴至胰化大豆硫酸镁琼脂平板上，滤膜与琼脂之间应无气泡。36℃士1℃培养 4 h～5h，然后将滤膜移至MFC琼脂平板上，除去气泡，44.5℃士0.5℃培养24h士2h。6.4.2计数计数所有蓝色的阳性菌落方格数，取两次计数的平均值，按式(1)求得每毫升样品中的粪大肠菌群数。6.5大肠杆菌测定6.5.1 培养将 6.1的滤膜紧贴至胰化大豆硫酸镁琼脂平板上,滤膜与琼脂之间应无气泡。36℃士1℃培养4 h~5h，然后将滤膜移至胰蛋白陈胆汁琼脂平板上，除去气泡，