NYT 724-2003饲料中拉沙洛西纳的测定 高效液相色谱法.pdf

ICS 65. 120B 20NY中华人民共和国农业行业标准NY/T 7242003饲料中拉沙洛西钠的测定高效液相色谱法Determination of lasalocid in feeds-High performance liquid chromatography2004-03-01实施2003-12-01 发布中华人民共和国农业部发布 NY/T 7242003前言本标准是在参阅了美国全国饲料协会（NFIA)推荐的通用分析方法及国内外大量文献的基础上，根据我国技术发展水平研究制定的，采用了高效液相色谱(HPLC)-荧光检测法。本标准由中华人民共和国农业部和全国饲料工业标准化技术委员会提出。本标推由全国饲料工业标准化技术委员会归口。本标准起草单位：国家兽药评价中心（中国农业大学动物医学院）。本标准主要起草人：沈建忠、张素霞、刘金凤、β于明。 NY/T 724—2003饲料中拉沙洛西钠的测定高效液相色谱法1范围本标准规定了检測动物饲料中拉沙洛西钠含量的高效液相色谱方法。本标准适用于配合饲料、浓缩饲料和添加剂预混合饲料中拉沙洛西钠含量的测定。本方法检测限为 5 mg/kg.2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有修改单(不包括勘误内容)或修改版均不适合本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用本标准。GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T14699.1饲料采样方法3方法原理用甲醇提取试样中的拉沙洛西钠，以磷酸盐缓冲液-乙腈-甲醇作为流动相，用高效液相色谱—荧光检测法分离测定。4试剂和溶液除非另有说明，本法所用试剂均为分析纯，水为去离子水，符合GB/T6682二级用水的规定。4.1乙睛：色谱纯。4.2甲醇:色谱纯。4.3磷酸盐缓冲液(pH=7):准确称取3.121g磷酸二氢钠(NaH,PO.·2HzO)和7.164g磷酸氢二钠(NazHPO.·12H,O)，分别用水溶解，定容至 1 000 mL,得到浓度 c(NaH,PO。·2HzO)=0.02 mol/L磷酸二氢钠溶液(A液)和浓度c(NazHPO4·12Hz0)=0.02mol/L。磷酸氢二钠溶液(B液）。将A液与B液按3.9+6.1的比例混合，配制成磷酸盐缓冲液（调pH=7)。4.4拉沙洛西钠标准液：4.4.1拉沙洛西钠标准贮备液：准确称取拉沙洛西钠标准品（纯度≥98%)0.1000g，置于100mL容量瓶中，用甲醇溶解，定容，其浓度为1000μg/mL的储备液，置4℃冰箱中保存。4.4.2拉沙洛西钠标准工作液：分别准确吸取一定量的标准贮备液（4.4.1)，置于10mL容量瓶中，用甲醇稀释、定容，配制成浓度为 2.5 μg/mL,5.0 μg/mL,7.5 μg/mL,10. 0 μg/mL,12.5 μg/mL,17.5 μg/mL的标准工作液。5仪器和设备实验室常用仪器、设备。5.1高效液相色谱仪：配荧光检测器。5.2 离心机。5.3振荡器。1 NY/T 724—20035.4玻璃具塞三角瓶（250 mL）。5.5微量进样器。5.6微孔滤膜(0.45 μm)。6试样制备按GB/T14699.1规定，取有代表性的样品，四分法缩减取约200g，经粉碎，全部过1mm孔筛，混勾装人磨口瓶中备用。7 测定步骤7.1试样提取称取一定量的试样（10.0g配合饲料，或5.0g浓缩饲料，或1.0g添加剂预混合饲料），置于250 mL玻璃具塞三角瓶中，加人40 mL甲醇，往复震荡30 min。静止10min，过滤。再向试样中分别加入 30 mL甲醇,重复提取两次。合并三次提取液，用甲醇定容至100 mL。取 10 mL置离心管中，3000r/min离心5min，取上清液用0.45μm微孔有机滤膜过滤作为试样溶液，供高效液相色谱分析。7.2HPLC 色谱条件a）色谱柱：C18柱，长150mm，内径4.6mm，粒径5μm，或相当者。b)柱温;室温。c)流动相：磷酸盐缓冲液（4.3）+乙腈+甲醇（25+35+40）。d)流动相流速：1.0 mL/min。e)激发波长：310nm。f)发射波长：420nm。g）进样体积:20 μL。7.3 HPLC 测定取适量试样溶液(7.1)和相应浓度的标准工作液（4.4.2)，作单点或多点校推，以色谱峰面积积分值定量。8 结果计算与表述8.1试样中拉沙洛西钠的含按式(1)计算：m1X一Xn(1)m式中:X-一试样中拉沙洛西钠的含量，单位为毫克每千克(mg/kg)；-HPLC试样色谱峰对应的拉沙洛西钠的质量，单位为微克（μg)；m1试样质量，单位为克(g)；m-稀释倍数。n-8.2测定结果用平行测定的算术平均值表示，保