SNT 2269-2009进出口贝肉中大田软海绵酸的检测 液相色谱-串联质谱法.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 2269--2009进出口贝肉中大田软海绵酸的检测液相色谱-串联质谱法Determination of okadaic acid in shellfish meat for import and export-LC-MS/MS method2009-09-01实施2009-02-20 发布中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局 SN/T 2269---2009言前本标准的附录 A、附录 B均为资料性附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国上海出入境检验检疫局。本标准主要起草人：方晓明、王敏、唐毅锋、王传现。本标准系首次发布的出人境检验检疫行业标准。 SN/T 2269—2009进出口贝肉中大田软海绵酸的检测液相色谱-串联质谱法1范围本标准规定了进出口贻贝和蛤中大田软海绵酸的制样和液相色谱-串联质谱检测方法。本标准适用于进出口贻贝和蛤中大田软海绵酸的检测。2测定方法2.1方法提要试样中的大田软海绵酸用甲醇/水提取，再用三氯甲烷抽提，经Sep-pak silica固相萃取柱净化后，用C18柱色谱分离，选择电喷雾正离子模式质谱检测，外标法定量。2.2试剂和材料除另有规定外，所用试剂均为分析纯，水为二次蒸馏水或相适应的去离子水。2.2.1乙腈：液相色谱级2. 2. 2 甲醇。2. 2. 3 甲酸。2.2.4正已烷。2. 2. 5三氯甲烷。2. 2. 6丙酮。2. 2. 7氮气：纯度99.9%。甲醇-水（80+20）。2. 2. 82. 2. 9 正已烷-丙酮-水（20+80+0.3）。甲醇-丙酮-水（3+97+0.3）2. 2. 10甲醇-丙酮-水（50+50+0.3）。2. 2. 1120.1%甲酸水溶液（含2mmol/L乙酸铵）：1L水中加人1.0mL甲酸和0.156g乙酸铵。2. 2. 12乙腈-0.1%甲酸水溶液（含2mmol/L乙酸铵）（30-70）。2. 2. 13+大田软海绵酸（Okadaicacid,Ca4HesO13,CAS号：78111-17-8)标准物质：纯度大于等于98.0%。2.2. 145大田软海绵酸标准储备液：准确称取适量的大田软海绵酸标准品，用甲醇配制成10μg/mL的2. 2. 15标准储备液，于一18℃中可保存半年。根据需要可将储备液再稀释成适当浓度的中间溶液。2.2.16大田软海绵酸基质标准工作溶液：根据需要吸取适量大田软海绵酸标准储备液或中间溶液（2.2.15），用空白样品提取液稀释成适当浓度的基质标准工作溶液。基质标准工作溶液在一18℃保存，可使用1周。2.2.17 Sep-pak silica 柱：使用前小柱预先用 10 mL丙酮（含0. 3%水）、10 mL甲醇（含 0. 3%水）和10mL正已烷-丙酮-水（20+80+0.3）活化，流速为2mL/min。2.3仪器和设备2.3.1液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾离子源。2. 3.2固相萃取装置。2.3.3恒温氮吹装置。2.3.4均质机。 SN/T 2269—20092. 3.5 旋涡混合器。2.3.6离心机：最大转速 4 000 r/min。2. 3.7 带刻度离心管:15 mL。2. 3. 8 0. 45 μm 有机相针式过滤膜。2. 4 测定步骤2.4.1样品制备从抽取的原始样品中取可食部分，放人搅碎机中搅碎至匀浆状，均分成两份，装人清洁的容器内，作为试样。密封，并标明标记。将试样于一18℃以下冷冻保存。制样操作过程中，应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化2. 4.2提取及净化称取经捣碎成浆的试样约2g（精确至0. 01 g)于15mL离心管中，加 4. 0 mL甲醇-水（2.2.8)，超声提取5min，于3500r/min离心10min，吸取上清液于另一15mL离心管中。残渣用4.0mL甲醇水（2.2.8)重复提取一次，合并上清液，最后用甲醇-水（3.2.8）定容至10.0mL。从定容的溶液中吸取5.0mL于另一15mL离心管中，加人5mL正已烷，涡旋混匀，静置分层，弃去正已烷层。加人1mL水和6mL三氯甲烷，涡旋混匀，静置分层，吸取水相（上层）于另一15mL离心管中，再加人6mL三氯甲烷，涡旋混勾，静置分层，弃去上层水相，合并三氯甲烷提取液，收集于试管中，在60℃中用氮气吹干。用1.0mL正已烷-丙酮-水(2.2.9)溶解上述残余物，经过活化的 Sep-pak silica柱，分别用1mL正已烷-丙酮-水(2.2.9)和10 mL甲醇-丙酮-水(2.2.10)淋洗,最后用10. 0 mL甲醇-丙酮-水(2.2. 11)洗脱,收集洗脱液于试管中，于45℃中用氮气吹干。残余物用1.0mL甲醇溶解，过 0.45 μm滤膜，滤液供测试。2.