SN 1168-2002猴志贺氏菌检验操作规程.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 1168—2002猴志贺氏菌检验操作规程Protocol of examination for shigella in monkeys2002-11-25发布2003-05-01实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局 SN/T 1168—2002前言本标准在参考国内、国外实验室的检验规程和总结了实践经验制定的。本标准的附录 A、附录B为规范性附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国云南出人境检验检疫局。本标准主要起草人：董俊、杨建明、肖莱海、杨晶焰、赵颜润。本标准系首次发布的检验检疫行业标推。I SN/T 1168---2002猴志贺氏菌检验操作规程1范围本标规定了猴志贺氏菌的检验方法。本标准适用于猴志贺氏菌的检验。2 规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而戏为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适朋于本标准。GB4784.5一1994食品微生物学检验志贺氏菌检验GB4789.28-1994食品微生物学检验染色法、培养和试剂GB/T 6682---1992分析实验室用水规格和试验方法（二级水）3设备和器材3.1 温箱。3.2 天平。3.3显微镜。3.4无菌棉拭子。3.5接种榨、铂金丝。3.6载玻片。3.7 灭菌平Ⅲ。3.8灭菌试管、试管架。3.9三角烧瓶。3.10酒精灯。3. 11石硝酸纤维素滤膜：150mm×50mm，0.45μm。临用时切成两张，每张70mm×50mm，用铅笔划格，每格6mm×6mm。每行10格，分6行。灭菌备用。4 培养基和试剂4.1缓冲甘油盐水保菌液：见附录A。4.2Cary-Blair 运送培养基：见附录 A。4.3革兰氏阴性杆菌增菌液（GN)：按GB4789.28--1994中4.17规定。4.4沙门氏-志贺氏琼脂培养基（SS）：按GB4789.28-1994中4.22规定。4.5麦康凯琼脂培养基：按GB4789.28-1994中4.24规定。4.6三糖铁(TSI)琼脂培养基：按GB4789.28-1994中4.26规定。4.7葡萄糖半固体管：按GB4789.28-19944.31规定。4.8半固体管：按GB4789.28-1994中4.30规定。4.9葡萄糖铵琼脂：按GB4789.28—1994中3.8规定。 SN/T 1168--20024.10尿素琼脂：按GB4789.28-1994中3.15规定。4.11西蒙氏柠檬酸盐琼脂：按GIB4789.28—1994中3.5规定。4.12筑化钾（KCN)培养基：按GB4789.28—1994中3.16规定。4.13氮基酸脱羟酶试验培养基：赖氮酸、鸟氨酸及对照培养基：按GB4789.28-1994中3.12规定。4.14糖发酵管：棉子糖、甘露醇、甘油、七叶苷及水杨苷：按GB4789.28—1994中3.2规定。4.155%乳糖发酵管：按GB4789.28—1994中4.32规定。4.16蛋白陈水、靛基质试剂：按GB4789.28—1994中3.13规定。4.17志贺氏菌属诊断血清：由指定单位提供。5检疫程序见附录 B。6操作步骤6.1采样、运输和保存6.1.1将灭菌棉拭子用增菌液或生理盐水湿润后真肠采样或采集新鲜粪便，没入（GN增菌液或直接接种在 SS和麦康凯琼脂平板上。6.1.2样品采集后如需延迟至4h以上方能送检的，可保存于缓冲甘油盐水保菌液或Cary-Blair培养基中。Cary-Blair运送培养基只能保存72 h;缓冲甘油盐水保菌液仅用于志贺氏菌属培养的粪便样品保存，效果不如运送培养基，液体变酸（黄色）后不可再用。6.2增菌将GN增菌液置36℃土1℃培养4h～8h。培养时间视细萄生长的情况而定。当培养液出现轻微混独时即应终止培养。6. 3分离和初步生化试验6.3.取增菌液或用所采样品直接划线于SS和麦康凯琼脂培养基上，于36℃士1℃培养18h～24h。志贺氏菌在以上培养基上星现无色透明不发酵乳糖的菌落。6.3.2在SS和麦康凯琼脂平板上挑取可疑菌落，接种三糖铁养基和葡萄糖半固体管各1管。般应多挑几个菌落，以防遗漏。经36℃土1℃培养18h～24h，分别观察结果。6.3.3在三糖铁琼脂培养基和葡葡糖半固体管上有以下反应的可以判为志贺氏菌阴性。在三糖铁琼脂斜面上呈蔓延生长的培养物。在三糖铁琼脂培养基上产生硫化氢培养基变为黑色的培养物。在三糖铁琼脂培养基上18h～24h内发酵乳糖、蔗糖的培养物（三糖铁琼脂培养基斜面变为黄色)。在三糖铁琼脂培养基上产气的培养物。凡在三糖铁琼脂培养基上