NY_T 2058-2011水稻二化螟抗药性监测技术规程毛细管点滴法.pdf

ICS 65.020B 15NY中华人民共和国农业行业标准NY/T 2058—2011水稻二化抗药性监测技术规程毛细管点滴法Technological rules for monitoring insecticide resistance in striped stemborer,Chilo suppressalis Walk.,using topical application method2011-09-01 发布2011-12-01实施中华人民共和国农业部发布: NY/T 2058-2011前言本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。本标准由中华人民共和国农业部种植业管理司提出并归口。本标准起草单位：全国农业技术推广服务中心、南京农业大学。本标准主要起草人：邵振润、沈晋良、李永平、胡君、张帅、高聪芬、何月平、周威君、苏建亚。 NY/T2058-—2011水稻二化螺抗药性监测技术规程星毛细管点滴法1范围本标准规定了毛细管点滴法监测水稻二化对杀虫剂抗性的基本方法。本标准适用于水稻二化对具触杀作用的有机氯、有机磷酸酯、氨基甲酸酯、沙蚕毒素类、苯基吡唑类、昆虫生长调节剂及大环内酯类等常用杀虫剂的抗性监测。2仪器设备电子天平（感量0.1mg）；天平(感量1g)；培养皿（小培养皿：直径5cm，高1.2cm；大培养皿：直径18.5cm，高3cm）；养虫笼（长23cm×宽23cm×高32cm）；青霉素瓶（容量为5mL）；移液管或移液器；容量瓶（10mL、25mL）；玻璃广口瓶或果酱瓶（瓶底直径8cm，高10cm）；毛细管点滴器：容积通常为0.04μL～0.06μL（精确度为0.01μL)；钢精锅（中号：直径24cm，高13cm；大号：直径33cm，高18cm）；调节电炉（电压220V，功率1000WX2）；白色塘瓷盆（长30cm、宽20cm、高4.5cm）；手提式压力蒸汽灭菌器；恒温培养箱、恒温养虫室或人工气候箱。3试剂与材料3.1生物试材3.1.1试虫：水稻二化（ChilosuppressalisWalk.)3.1.2水稻品种：采用感虫品种汕优63或一种当地有代表性的、非抗虫杂交水稻品种。3.2试验药剂杀虫剂原药。4试验步骤4.1试材准备4.1.1试虫采集选当地具有代表性的水稻秧田或本田3块以上，采集二化卵块100块以上；或白天在田间用捕虫网、养虫笼等工具捕捉成虫或夜晚在黑光灯下诱集成虫200头以上，供室内饲养。4.1.2试虫饲养成虫产卵采集的成虫放人恒温培养箱中的养虫笼中，相对湿度为85%～90%，在未用药处理的感虫、生长嫩绿的秧苗上分批产卵（1d～2d一批），所产卵块分批在恒温培养箱中培育至黑头。1 NY/T 2058—20幼虫饲养将大田采集或室内饲养已黑头的卵块接人栽有5cm～6cm高稻苗的玻璃广口瓶或果酱瓶中（每瓶幼虫密度控制在约100头），置于温度为28℃士1℃、光周期为16h：8h(L：D)的恒温培养箱、恒温养虫室或人工气候箱中，设弱下光照，以免幼虫逃逸。饲养至生理状态一致、体重范围在每头6mg～9mg的4龄幼虫供试。4.1.3供试水稻取一定量水稻种子在适宜的温度下（一般28℃）浸种2d，催芽露白后，播人玻璃广口瓶或果酱瓶中，瓶口封上一层保鲜膜并扎少量透气孔，置于适宜的温度下培养，待稻苗长至5cm～6cm时即可供初孵幼虫饲养用。4.1.4试验人工饲料按附录A配制人工饲料，并于4℃冰箱中储存，或可现做现用。试验前从冰箱中取出，待回温至室温，即可用于毒力测定试验。每培养皿加长约2cm、厚约0.5cm的条状饲料供饲养幼虫用。4.2药液配制在电子天平上用容量瓶称取一定量的原药，用有机溶剂（如丙酮等，杀虫单、杀丹等用体积为1：1的丙酮：水混合液)溶解，配制成一定浓度的母液。用移液管或移液器吸取一定量的母液加人青霉素瓶，用上述溶剂配制成一定质量浓度的药液供预备试验，根据预备试验结果，再按照等比法用青霉素瓶配制5个～7个系列质量浓度，每个浓度的药液量不宜少于2mL。4.3处理方法挑取每头体重为6mg～9mg4龄幼虫置于盛有人工饲料的培养皿中，每皿5头，每浓度重复6次，共30头。供试药液浓度按从低到高的顺序处理，用容积为0.04μL～0.06μL的毛细管点滴器将药液逐头点滴于幼虫胸部背面，以点滴丙酮(或丙酮：水=1：1)为空白对照。处理后将培养皿转移至温度为28℃士1℃，光周期为L：D=16h：8h条件下饲养和观察。4.4结果检查分别于处理后48h(有机磷酸酯类、氨基甲酸酯类、有机氯类等杀虫剂)、72 h(大环内酯类和苯基吡唑类杀虫剂）、96h(沙蚕毒素类杀虫剂)、120h（昆虫生长调节剂类杀虫剂)检查试虫死亡情况，记录总虫数和死虫数。5数据统计与分析5.1死亡率计算方法根据调查数据，计算各处理的校正死亡率。按式（1)和式（2)